当归研究现状综述

【5

当归挥发油的研究：

当归挥发油分为中性油、酚性油、酸性油，其主要成分为藁本内酯、正丁基%内酯等，具有镇静大脑、兴奋和痹延髓中枢的作用，并可弛缓子宫肌肉及治疗月经不调、痛经等病症。当归挥发油的提取方法包括有机溶剂浸取法、水蒸汽蒸馏法、超临界CO2萃取法。

有机溶剂浸取法。有机溶剂浸取法指溶剂进入到药材细胞组织，将药材中的化学成分提取出来的方法。何东平等[2]对溶剂法提取当归油进行了研究。采用正己烷、95%乙醇、石油醚及石油醚-95%乙醇混合溶剂对萃取当归油进行了研究。结果表明，采用正己烷浸泡后再用95%乙醇浸出得到的提取率最高，可达15.43%。而且利用有机溶剂提取法从当归中分离出一种抗肿瘤的多糖。不过，未对当归挥发油进一步分析，同时也未测出其主要成分藁本内酯的含量。郭瑛琏[3]也对95%乙醇、甘油、石油醚及乙醇-水等溶剂对当归中有效成分进行了提取研究。结果表明当采用乙醇-水混合溶剂比为7:3时挥发油得率最高，为8.2%，未对挥发油做进一步分析。

水蒸汽蒸馏法。水蒸汽蒸馏技术是一项历史悠久的经典提取方法，目前仍广泛应用在中药挥发油的提取中。李桂生等[4]利用水蒸汽蒸馏法提取当归挥发油并对当归油进行了分析。当归油的总收率为1.3%，（Z）-藁本内酯的收率为67.1%，且产生了4-羟基-3-甲基乙酰苯、三甲基苯甲醛等次生物质。结果表明水蒸汽蒸馏法提取当归挥发油有很多弊端。郑春生等[5]对传统的水蒸汽蒸馏法加以改进，使用浸提-减压蒸馏工艺提取挥发油，并对工艺进行了优化。结果表明与一般蒸馏法相比，挥发油得率可以提高40%~50%，藁本内酯的含量超过50%，是较为理想的提取工艺方法。

超临界CO2萃取法。超临界萃取是近30年来迅速发展起来的新型分离技术，由于超临界CO2萃取无毒、无溶剂残留、无污染，十分符合绿色产品发展的要求，被称作“绿色分离技术”。黄宝华等[6]利用正交试验法对超临界CO2萃取当归中藁本内酯的工艺进行了优化。结果最佳工艺为萃取温度40℃，萃取压力35MPa，CO2消耗量60ml，冰水浴收集产品。在此条件下藁本内酯收率为0.404%。李菁等[7]用超临界CO2萃取技术从当归中萃取出挥发油并进行了分析。与水蒸汽蒸馏法相比，超临界CO2萃取法收率提高了4倍，同时由于萃取温度低，萃取出一系列的烷烃类、有机酸及其酯类。李桂生等[8]考察了当归挥发油的提取方法，发现超临界CO2萃取法与水蒸汽蒸馏法提取的当归挥发油中（Z）-藁本内酯的含量基本一致，而前者的收率为后者的2倍。

在当归挥发油的萃取方法中，有机溶剂浸取法具有处理量大、能耗较低、易于连续操作等特点，但溶剂用量大，会对环境造成污染。在实际生产中，当归挥发油的提取大多采用水蒸汽蒸馏法，但得率较低，同时由于提取过程温度高，易造成对热不稳定及易氧化成分的破坏。超临界CO2萃取挥发油得率高于水蒸汽蒸馏法，而且具有很多传统方法无法比拟的优点，将具有良好的发展前景。 参考文献：

[2]何东平，宋光森，方立中，等援 溶剂提取当归油研制报告[J].粮食与油脂，1996，2:24-26. [3]郭瑛琏.当归有效成分提取方法探讨[J].浙江医学情报，1991，2：44-46. [4]李桂生，刘岩，刘珂援.水蒸汽蒸馏法对当归挥发油提取过程中成分异构化的影响[J].2001，23(11)：784-786.

[5]郑春生，姚宝书，李梅援.当归挥发油提取工艺的研究[J].援天津轻工业学院学报，2001，（1）：32-34.

[6]黄宝华，张焜，彭兰乔.超临界CO2萃取当归中藁本内酯工艺条件研究[J].中草药，2002，

6：514-515. [7]李菁，葛发欢，黄晓芬，等援超临界CO2萃取当归挥发油的研究[J].中药材，1996，4:187-189. [8]李桂生，马成俊，刘志峰.超临界CO2萃取法与水蒸汽蒸馏法提取对当归挥发油的比较[J].中草药，2001，32(7)：581-583.】2011年文献中所述 【6

阿魏酸的提取：阿魏酸的提取有渗滤法、超声法、超临界 悦韵圆萃取法。渗滤法。

渗滤法是往药材粗粉中不断添加浸出溶剂使其渗过药粉，从下端出口流出浸出液的浸取方法。在实际生产中，当归中阿魏酸的提取大多采用此法。 文献《当归干、鲜品中游离阿魏酸和总阿魏酸含量》：目的：采用HPLC测定当归鲜品与干品中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量，并对其进行比较。方法：ZORBAX Eclipse XDB-C18。(4．6 mm×250mm，5μm)分析柱，流动相乙腈－0.0085％磷酸(17：83)，检测波长316 nm，

－

柱温35℃，流速1．0 mL.min1，进样量为10μL。测定样品中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量。结果：游离阿魏酸和总阿魏酸分别在0．0242～0．121 0μg和0．0242~0．192 36μg呈良好的线性关系。回收率分别为96．34％，97．35％；09年当归干品中游离阿魏酸含量最高，鲜品中总阿魏酸含量最高。结论：该方法准确简便，具有相对良好的重复性和稳定性，有利于提高当归药材的质量控制。】 【7

当归总黄酮提取及其体外抑菌活性研究：目前．黄酮的提取方法有水煎煮

法、醇提取法、微波提取法、超声波法等。

目的:测定当归中总黄酮，并测定当归中黄酮提取物的体外抑茵活性。方法:以乙醇一水为溶剂，通过正交实验对提取工艺进行优化；采用杯碟法测定抑菌圈直径；采用液体稀释法测定最低抑茵浓度。结果:提取温度85℃，提取时间2h，乙醇浓度为70％，固液比为l：50时，测得\归中总黄酮含量1．59％。当归黄酮提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、青霉都有较强的抑制作用，对这4种细菌的最低抑茵浓度分别为1．0，1．0，0．50，1．0 mg.ml-1。结论:当归黄酮对细茵有一定的抑制作用，是一种天然抑菌剂。】 【8

当归造血作用研究进展：

8.1促进造血干／祖细胞增殖

再生障碍性贫血患者CD34+造血干／祖细胞质、量缺陷，造血干／祖胞数和细胞集落形成数均较正常人少，中药治疗再生障碍性贫血机制之一包括直接或间接促进造血干／祖胞增殖。研究发现当归可促进氟尿嘧啶诱导贫血模型小鼠红系造血，机制可能与活化幼稚红细胞增殖及降低干扰素γ有关[2]。体内注射当归多糖可显著促进正常或贫血小鼠的髓系造血祖细胞增殖分化(如爆式红系集落形成单位、红细胞集落形成单位、粒单核细胞集落形成单位和巨核细胞集落形成单位)；经当归多糖诱导制备的成纤维细胞、巨噬细胞、脾细胞和骨骼肌条件培养液能提高造血祖细胞集落产率；提示当归多糖促进造血的机制可能与直接或间接刺激造血诱导微环境的巨噬细胞、成纤维细胞、淋巴细胞等分泌较高活性的造血生长因子有关[3]。而当归多糖促血小板生成和造血促进作用机制可能与直接促进巨核细胞增值和间接促进骨髓基质细胞增殖相关，但其作用弱于促血小板生成素[4]。进一步研究发现体外培养体系中当归多糖无直接刺激造血祖细胞增殖分化作用，只有存在外源性造血因子(如粒单核集落刺激因子、白细胞介素3、血小板生成素)才可促进骨髓混合细胞集落产率[5]。 8.2抗凋亡作用

骨髓造血微环境由骨髓微循环、基质细胞、细胞外基质及一些细胞因子构成。造血微环境是造血细胞定居于其中并发育和分化的部位，它不但为造血细胞提供场所和营养，而且积极参与造血干细胞定居和分化调控，并对造血祖细胞增殖以及成熟和释放产生影响，从而在

血细胞生成全过程中起调控、诱导和支持作用。研究发现当归注射液可促进免疫诱导再生障碍性贫血模型小鼠骨髓血窦恢复，提高小鼠骨髓造血细胞线粒体和内质网的数量及提高骨髓单个核细胞数量，提示当归通过改善骨髓造血微环境而促进造血[6]；此外当归注射液可增强辐射损伤小鼠骨髓基质细胞血管内皮生长因子及其受体表达，促进骨髓微环境的修复[7]。当归多糖本身无直接刺激人骨髓造血作用，可能通过促进造血微环境中的基质细胞分泌粒-单核细胞集落刺激因子和白细胞介素3 mRNA的表达而间接促进骨髓造血[5]。近期发现当归多糖可使小鼠骨髓基质细胞DNA合成增加及凋亡减少，提示当归多糖可通过改善造血微环境来调控造血[8]。 8.3免疫调节作用

目前研究认为再生障碍性贫血是以造血组织为靶细胞的自身免疫性疾病，存特定遗传背景下通过分子模拟或表位扩增作用对造血干细胞细胞抗原产生自身免疫应答。再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞哑群失衡，CD4+T细胞比例减少，CD8+T细胞比例增加，有抑制T细

[11]

胞自发活化作用的CD4+CD25+ FOXP3+调节性T细胞减少，异常活化Thl细胞分泌大量造血负调控因子(如白细胞介素2、干扰素γ、肿瘤坏死因子α)，其中干扰素γ可能是通过胞内非受体型酪氨酸激酶／蛋白激酶θ信号通路上调T-bet转入因子而分泌增加[12]。干扰素可能为异常活化的T淋巴细胞破坏骨髓造血的中心环节，可通过多途径参与再生障碍性贫血的发生，如干扰素γ可诱导细胞表达白细胞介素2受体从而促进T细胞增殖，损伤造血祖细胞；可上调CD34+细胞Fas受体，增强细胞对凋亡的敏感性而诱导造血干／祖细胞过度凋亡；可使一氧化氮合酶的基因上调，并通过干扰素调节因子1活化一氧化氮合酶，使一氧化氮合成增加损伤DNA及促进细胞凋亡而抑制造血[13]。体外培养研究当归多糖可直接刺激正常小鼠Thl相关细胞因子白细胞介素2、干扰素γ及其RNA的表达；同时抑制Th2细胞相关细胞因子白细胞介素4的表达，增加CD4+T细胞及降低CD8+T细胞，平衡Th1／Th2比值达到调节免疫作用；此外还可通过激活非特异免疫细胞(巨噬细胞、NK细胞)来调节免疫[14]

。

8.4信号转导通路

丝裂原活化蛋白激酶是细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路存在于大多数细胞内，将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞生物学反应(如细胞增殖、分化、转化及凋亡等)的过程中具有至关重要的作用。体外无血清细胞培养试验发现当归可促进小鼠骨髓单个核细胞增殖是通过激活丝裂原活化蛋白激酶下游胞外信号调节激酶1／2和p38两条通路起作用，而应激活化蛋白激酶／c—Jun氨基末端激酶信号通路则无此作用[16]。另有研究显示当归多糖也可能协同促红细胞生成素增强促红细胞生成素受体介导的Janus激酶(蛋白酪氨酸激酶2)和细胞信号转导及转录活化因子通路(信号转导和转录激活因子5)的酪氨酸磷酸化而发挥促进造血作用[17]。 8.5造血干细胞动员作用

外周血干细胞移植已成为治疗血液系统疾病和严重自身免疫性疾病的最有效方法之一，正常情况下外周血干细胞的数量很少，因此需要进行动员才能获得足够数量的外周血干细胞以保证移植成功。近期研究发现当归多糖可动员小鼠造血祖细胞从骨髓向外周血迁移，可协

[18]

同重组人粒细胞集落刺激因子增强动员作用，其动员的小鼠外周血造血。干／组细胞移植后可重建造血衰竭小鼠长期造血[19]。当归多糖的动员机制可能是通过降低小鼠骨髓基质细胞表面细胞间粘附分子l，血管细胞粘附分子1的表达及降低小鼠骨髓单个核细胞CD49d的表达从而减弱骨髓基质细胞对骨髓造血干细胞的黏附[20].

研究表明当归通过促进造血干细胞和骨髓基质细胞增殖、抑制造血干细胞凋亡、改善造血微环境、调节免疫和造血干细胞动员等作用，进而影响骨髓有核细胞分裂周期活动，最终达到造血调控的目的。在体外无血清细胞培养条件下，当归主要通过激活丝裂原活化蛋白激

酶下游两条通路胞外信号调节激酶l／2和p38来促进骨髓单个核细胞增殖，此外当归多糖也可协同促红细胞生成素活化促红细胞生成素受体介导的信号转导通路发挥其造血促进作用，提示当归多糖具有类造血生长因子作用，是否还可活化其他调节造血干／祖细胞增殖的信号通路，或是也可协同其他造血生长因子介导的信号传导通路调节造血，这有待于进一步研究明确。这将深化人们对当归治疗再生障碍性贫血的机制认识，为当归治疗再生障碍性贫血提供新的理论依据和实验学支持。 参考文献：

[2]Hatano R,Takano F ,Fushiya S.Water-soluble extracts from Angelica acutiloba Kitagawa enhance hematopoiesis by activating immature erythroid cells in mice with 5-flluorouracil-induced anemia[J].Appl Clin Pediatr,2005,20(1):20-21.

[3] 王亚平，祝彼得．当归多糖对造血祖细胞增殖调控机理的研究[J]．中华医学杂志，1996，76(5)：363-366．

[4] 莫妹，于洁，杨默，等．当归多糖与血小板源性生长因子、血小板生成素对巨核细胞造血影响的比较研究[J]．中华儿科杂志．2008，46(1)：4548．

[5] 郑敏，王亚平．当归多糖对人髓系多向造血祖细胞增殖分化的影响及其机理研究[J]．解剖学杂志，2002，25(2)：501-701．

[6]Zhao SQ,Liang ZX ,Wang H,et al .Influence of Angelica sinenisis injection on bone marrow history and ultrastructure in immune-Induced aplastic anemia mice[J].Appl Clin Pediatr,2005,20(1):20-21.

[7] 石清照，罗劲松，夏利平，等．当归注射液影响辐射损伤小鼠骨髓基质细胞血管内皮生长因子及其受体fit一1的表达[J]．中国组织工程研究与临床康复，2007，11(11)：2100-2101． [8] 王改琴．贾书花，吴宏．当归多糖对小鼠骨髓基质细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响[J]．四川解剖学杂志，2009，17(1)：6-8． [11] Solomou EE，Rezvani K，Mielkc S．et a1．S．Deficient CD4+；CD25+ FOXP3+T regIllalory cellsin acquired aplastic∞emia[J]．Blood，2007，110(5)：1603—1606．

[12] Solomou EE，Keyvanfar K，Young NS．T-bet，a Thl transcription factor，is up-regulated in T cells from patients with aplasfic anemia[J]．Blood，2006，107(10)：3983-3991． [13] Young NS，Calado RT，Scheinberg P．Current concepts in the pathophysiology and treatment of aplastic anemia[J]．Blood,2006，108(8)：2509-2519．

[14] YangTH，Jia M，Jia M，et a1．Immunomodulatory activity of polysaccharide isolated from Angelica sinensis[J]．hlt J Biol Macrotool，2006，39(4／5)：179一184． [16] Chen XP，Chen JH，zhang P，et a1．Angelica stimulates proliferation of murine bone marrow mononuclear cells by the MAPK pathway [J]．Blood Cell Mol Dis，2006，36(3)：402-405． [17] 华自森，宋姝丹，罗春燕，等．当归多糖协同Epo对造血干／祖细胞JAK2／ST AT信号传导通路的影响[J]．中国中药杂志，2009，34(24)：3268—3271．

[18] 胡晶，吴宏．当归多糖对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究[J]．中草药，2006，37(12)：1835一1838．

[19] 胡晶，冯敏，杨慧，等．当归多糖动员的造血干／祖细胞移植重建小鼠造血功能的研究[J]．第三军医大学学报，2007,29(23)：2236-2239．

[20] 王改琴，吴宏．当归多糖对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达和黏附功能的影响[J]．第四军医大学学报，2009，30(1)：53-56．】2010年文献中所述

9总结

当归是我国常用的传统中药，近年来，国内外学者对当归进行了大量的化学研究，但由

于当归的化学组成复杂，对当归的有效部位、有效成分群、有效成分及其相互转化等方面有待深入探讨。当归作为补血活血药，对心脑血管系统的药理作用研究很多，但当归单个化学成分对心脑血管系统的药理作用报道不多，主要还是以总煎液或某一部位或组方为研究对象，无法阐明是哪个成分在起作用，今后可以在这方面深入研究。相信随着现代分离手段的不断发展、更多化合物可得到成功分离和鉴定，结合现代药理学和生物学技术，当归的研究将取得更多的发展。（2010年文献中所述）