结核分枝杆菌抗体检测（胶体金法） 规程操作

标准化操作规程 临检室 鄱阳湖第二医院检验科

结核分枝杆菌抗体检测 (胶体金法) 规程操作

1、检验目的

本试剂盒可定性检测人血清中结构分枝杆菌抗体，用于临床结构病的辅助诊断。 2、检验原理

本试剂盒利用斑点免疫胶体金渗滤技术（DIGFA），将结核分枝杆菌特异性膜蛋白抗原分离纯化，点样并固化在硝酸纤维素膜上，膜上TB抗原捕获人血清样品中结核分枝杆菌抗体，被捕获的结核IgG抗体可用葡萄球菌A蛋白（SPA）胶体金缀合物标呈色（SPA能与IgG特异性结合），形成红色斑点，根据是否出现红色斑点即可判断阴、阳结果从而判断是否存在结核分枝杆菌抗体。 3、样本要求

必须使用新鲜血清标本，血浆标本必须用玻璃棒剥离纤维蛋白，保证血清无混浊沉淀。 4、试剂

4.1试剂名称：结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒（胶体金法） 4.2生产厂家：上海奥普生物医药有限公司 4.3包装规格： 20人份/盒

4.4贮存条件及有效期：2-8℃干燥处保存，有效期12个月。 5、检验方法：

5.1在反应板的反应孔中间，加入2滴封闭液，等待薄膜吸入； 5.2 取40μl新鲜的血清标本，加入反应孔中间，等待薄膜吸入； 5.3 在反应孔中间加入6滴洗活液，等待薄膜吸入； 5.4 在反应孔中间加入2滴金标液，等待薄膜吸入；

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5.4 在反应孔中间加入6滴洗涤液，等待薄膜吸收，目测结果； 6、结果判断

6.1 阳性——质控点显示红色，反应孔中间有红色斑点出现。 6.2 阴性——质控点显示红色，反应孔中间无红色斑点出现或仅为痕迹。

检验方法的局限性

少数标本（急性感染、高血脂、溶血等）可出现背景偏红，一般不影响结果判断，可通过将标本用封闭液1:3稀释，加样80μl背景将获得改善。严重乳糜血标本可能会阻塞硝酸纤维素膜孔，使背景很红，影响中间红色斑点有无的判别，不宜用本法测定。 7、注意事项

7.1 必须以单人份操作，严禁多标本同时检测，每个标本的操作步骤需要连续进行，不宜停顿过长。

7.2 质控点显示红色表明试剂盒有效；阴、阳性对照也是确保定性结果可靠的一个环节，但临床阳性标本显色深浅可以与阳性对照不同。

7.3 血清、包括健康人血清属潜在生物危害物质，操作者应戴手套，测试后凡接触血清的物品应消毒后再丢弃。

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快速革兰氏染色液操作规程

1、检验目的

主要作于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。 2、检验原理

改良后的革兰氏染液不含对人体有害的石炭酸，碘液稳定无升华现象，保存时间长，且染色无沉淀，背景清晰，阴阳结果明显，染色结果将细菌分为革兰氏阳性（紫色）或革兰氏阴性（红色）两类。 3、试剂

3.1试剂名称：快速革兰氏染色液

4.2生产厂家：温州市康泰生物科技有限公司 4.3试剂组成：

R1：结晶紫染液 50ml 20ml 250ml 100ml 20ml R2：革兰氏碘液50ml 20ml 250ml 100ml 20ml R3：脱 色 液 100ml 40ml 250ml 100ml 20ml R4：复 染 液 50ml 20ml 250ml 100ml 20ml 4.3包装规格：4×100ml 4×250ml 4×20ml 4.4储存条件及有效期：10℃-30℃储存有效期三年。 5、操作步骤：

5.1 做一薄涂片，干燥后火焰固定

5.2 滴加1液，夏天染1分钟、冬天染2分钟、清水冲去染液 5.3 滴加2液，作用1-2分钟，水洗，并倒掉多余的水分。

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5.4 加3液脱色，不时摇动（约左右摇动10—15次），至无紫色脱落为止，水洗。

5.5 加4液复染，10秒内水冲洗

5.6 吸干或在空气中干后，置油镜下观察。 6、结果判定

革兰氏阳性菌 呈紫色 革兰氏阴性菌 呈红色 7、注意事项

7.1 结晶紫染液色时间不能太短，否则易出现假阴性或阴阳性 7.2 脱色液脱色时间不能太长，否则易出现假阴性或阴阳性 7.3 复染液复染时间不能长，否则易出假阴性或阴阳性