02第二章 细胞生物学研究方法

D．物体吸收了部分但非全部的射在它上面的光线 24．关于X射线衍射技术，下列哪项有误?

A．是测定生物大分子结构的一项适用技术 B．可测定蛋白质结晶分子中原子的空间排布

C．X射线是波长较短的电磁辐射，比电子的穿透力强 D．该技术能检测较薄的含水标本

25．关于共聚焦激光扫描显微镜，下列哪项叙述有误?

A．以单色激光作为光源

B．激光变成点光源后聚焦到标本成为点照明 C.图像信息要经电脑三维重建处理 D．所用标本须经超薄切片

27．现有匀浆的和已经过各级离心的鼠肝细胞溶液，下列哪一组分含有的线粒体最少?

A.进行离心之前的整个匀浆溶液 B．第一次低速离心后的上清液 C；经过高速超速离心后的上清液 D．以上的任何组分都没有线粒体

28．哪一种柱层析分离蛋白质是建立在分子质量基础上的?

A.离子交换层析 B．凝胶过滤层析 C．亲和层析 D．等电聚焦 29. 为什么透射电镜的照片没有颜色?

A．细胞内部结构无颜色，都为灰白色的暗影 B．彩色显微照片太昂贵了 C．彩色胶片尚未发明

D．照相的底片接受的是穿过样品的电子，而不是决定了颜色的各种波长的光

30．在电镜下面发现了一种新的细胞器，但却不能肯定是真的还是技术问题造成的人为现象．下列哪一项可证实推测?

A．在若干个相同来源的相同制备样品中找这一结构 B．在若干个不同来源的相同制备样品中找这一结构 C．在不同染色方法制备的样品中找相同结构

D．在不同的(或无)固定剂条件下制备的样品中找相同结构

31．氚的半衰期为12年，那么保存了24年的氚的放射性是最初的( )。 A．12％ B．25％ C．75％ D．已不存在 32. 光镜与电镜比较，下列各项中( )是不正确的。

A.电镜用的是电子束，而不是可见光

B．电镜样品要在真空中观察，而不是暴露在空气中 C．电镜和光镜的样品都需要用化学染料染色 D．用于电镜的标本要彻底脱水，光镜则不必

33．在递增细胞匀浆液的离心转速过程中最先沉淀下来的是( )。 A核糖体 B．线粒体 C．未破碎的细胞核 D．微体

34，为了解某一细胞培养物是否处于DNA合成时期，在具有放射性胸苷存在的情况下培养细胞，下列哪种方法是探测该标记脱氧核苷酸是否存在于核DNA中的最佳方法? ( )。

A．放射自显影 B．聚丙烯酰胺凝胶电泳 C.琼脂糖凝胶电泳 D．双向凝胶电泳

35. —般光学显微镜(用蓝色滤光片)，当物镜镜口率(NA)为1.4时，其分辨率极限和放 大倍数分别为( )。

A．~0．4μm，500倍 B．～0．2μm，1000倍 C．～0．2μm，500倍 D．~0．4μm，1000倍 36. 提高显微镜的分辨率最好的办法是( )。

A．增加放大倍数 B．缩短波长 C.增加波长 D．给标本染色

37. 人胚肺成纤维细胞体外培养大约能传代( )。

A．20次左右 B．150次左右 C．40~60次 D．无数次

38．在细胞分级抽提方法中，为了溶解膜系统，应选用( )。 A．TritonX-100 B．Tween 40

C.脱氧胆酸钠 D．0．25mol／L硫酸钠

39．假设你对重建生活细胞的有丝分裂过程中染色体的三维形态感兴趣， 你将选择哪种显微技术? A．冰冻—断裂显微术 B．共聚焦扫描术 C．光学显微术 D．扫描电子显微术

40．下列关于基因敲除实验的表述中，不正确的一项是( )。

A．需要胚性干细胞作为转化受体 B．需要体外构建重组体 C．敲除后，靶基因不再存在

D．一般说来，要经多次传代才能表现出敲除基因的缺陷表型

41．在Southern印迹法中应用的DNA片段和DNA探针相当于Northern印迹法中的( )

A. DNA片段和RNA探针 B．RNA片段和RNA探针 C．RNA片段和DNA探针 D．蛋白质片段和DNA探针 42. 在动物细胞培养过程中要用( )来进行观察。

A．相差显微镜 B．荧光显微镜 C．倒置显微镜 D．普通光学显微镜 43．关于放射自显影技术，下列哪项错误?

A．利用放射性同位素探测细胞内生物大分子动态变化的一种方法 B．包括宏观自显影、光镜自显影和电镜自显影等三种类型 C．具有灵敏度高和操作简便、无污染等优点

D．自显影时常用的感光材料，包括X射线胶片和原子核乳胶等

44. 人眼的分辨率为105nm，光学显微镜的分辨力能使人眼的分辨力提高( )

A. 100倍 B.500倍 C．1000倍 D．5000倍

四、简答题

1．简述冰冻蚀刻术的原理和方法。 2．单克隆抗体技术的基本原理是什么? 3．电子显微镜为何不能观察活标本? 4．比较放大率和分辨率。

5．比较透射电子显微镜和扫描电子显微镜。

6，用细菌质粒和噬菌体基因组克隆真核生物的DNA有什么不同? 7．比较差速离心和密度梯度离心。

8．克隆基因组DNA与克隆cDNA的区别。

五、实验设计与分析

1．在进行细胞组分的分离时，实验方案设计的一般原则是什么?

2．匀浆肝组织并且按图Q2—1所示离心分离了亚细胞组分。每一部分保留了小的等分试样

(1)对每一等分试样进行琥珀酸脱氢酶(SDH)的专一性酶分析，SDH是TCA循环中的一个酶。假如细胞分离得很完全，哪一部分将被检出有SDH活性呢?

(2)哪一部分会有最高的SDH专一活性(单位蛋白质活性)? (3)哪一部分有最多量的总蛋白质?

图Q2-1 速度离心分离细胞组分示意

(4)分离到最后时，核糖体存在于哪一部分?

3．凝胶过滤层析依据分子大小来分离不同分子。在溶液中小分子扩散快于大分子，而小分子通过层析柱却比大分子慢，为什么?若以特别快的流速过柱，将会出现什么情况?

4．用Sanger双脱氧核苷法测定一段短的核酸序列(8个核苷酸)。当4支试管中的所有片段都已被分离出来并用放射自显影法显示出来以后，可见图Q2—2的模式。此片段的核苷酸序列是怎样的?哪一端是5，端，哪一端是3，端?

图Q2-2 一个8核苷酸序列测序电泳图(引自Pruitt，1996)

5．解决下列问题可分别采取何种技术?

(1)证明在犯罪现场找到的头发中的DNA与被告犯罪嫌疑人的DNA是吻合的； (2)鉴定分泌到细胞外的糖蛋白激素，其糖基是在细胞的哪一部分被加上去的；

(3)寻找新的、便宜的而且丰富的人类生长激素来源，以便用于治疗生长激素缺乏症患者；

(4)确定酶蛋白中关键氨基酸的方法。 6．如何进行差速离心?

7．用什么方法追踪活细胞中蛋白质合成与分泌过程?包括哪几个步骤?

8．传统遗传学解决细胞生物学问题的方法是采用跟随信息由基因传到蛋白质的途径。生物化学的方法则是由蛋白质追踪回编码它们的DNA，例如，从蛋白质到基因。假如你正在研究一个有关细胞功能的问题，如果从基因开始，并试图推断该蛋白质的功能，简单描述可采取的基本步骤。再描述从一种特定的蛋白质开始，最终获得经过测序的该蛋白质基因所要采取的步骤。

六、问答题

1. 何谓原代培养、细胞株和细胞系?

1. 说明电子显微镜和光学显微镜的主要差别。 3．扫描隧道显微镜的工作原理及其优越性是什么?

4．用一个镜口角为70(θ=700)的显微镜研究亚细胞结构： (1)计算显微镜的分辨率，选择空气中的白色光。 (2)现在在光源和标本之间放置一块蓝色滤镜。蓝光的波长为450nm。这样能提高分辨率吗?如果可以的话，能提高多少?

(3) 用油镜(折射率：1．5)，仍然使用蓝色滤镜。现在分辨率是多少?如果有设备的话能提高此分辨率的水平吗?

5. 离子交换层析的原理是什么?

6. 讨论并比较电子显微镜与光学显微镜的优点及缺点。 7. 动物体细胞克隆有什么意义?

七 .名词释义

1 显微分辨率(microscopic resolution) 2. 电子显微术(electron microscopy) 3 放射自显影技术(autoradiography) 4 细胞培养(cell culture)

5 双向凝胶电泳(two-dimensional gelelectrophoresis) 6 核酸杂交(nucleic acid hybridization)

7 酵母人工染色体(yeast artificial chromosome，YAC)

8 研究人类疾病的动物模型(animal model for human disease) 9 荧光显微镜：(fluorescence microscope) 10 倒置显微镜(inverted microscope)

11 扫描电子显微镜(scanning electron microscope，SEM) 12 显微结构(microscopic structure)

13 超微结构(supper-microscopic structure) 14 共聚焦显微镜(confocal microscope)

15 核磁共振 (nuclear magnetic resonance，NMR）

第二章 细胞生物学的研究方法

一、填空题