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吸取2mL待测液,加入10mL蒸馏水,再在其中加入1%对氨基苯磺酸1mL和NaNO2溶液1mL,室温放置5min待混合液变成红色,再用蒸馏水补至25mL。在20-60min内510nm处比色,读取吸光度。
3.绘制a-萘胺标准曲线(2人一组)
以浓度为50ug/mL的a-萘胺溶液为母液。配制浓度为0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50ug/mL的系列溶液,各取2mL放入25mL具塞试管中(分别相当于加入0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100ug a-萘胺,具体操作见表5-1),加蒸馏水10ml,1%对氨基苯磺酸溶液1mL和NaNO2溶液1mL,室温放置5min待混合液变成红色,再用蒸馏水补至25mL。在20-60min内510nm处比色,读取吸光度。然后以a-萘胺含量(ug)为横坐标,吸光度作为纵坐标作图,即得标准曲线。
表5-1 根系活力测定
管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 完全 缺氮 对照 试剂(mL) (浸提液代替a-萘胺) 50ug/mla-萘胺0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2 2 2 蒸馏水 12 11.8 11.6 11.4 11.2 11.0 10.8 10.6 10.4 10.2 10 10 10 10 对氨基苯磺酸1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 NaNO2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
混匀,室温放置5min
蒸馏水 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11
五、结果分析 1. 根系活力的计算
在标准曲线上查得相应的a-萘胺的含量。从实验开始10min时的a-萘胺的含量A0(ug)减去a-萘胺的自动氧化量A'(ug),即为溶液中所有的a-萘胺的量。再减去30min后a-萘胺的含量At,即得被酶催化氧化的a-萘胺,以ug/(h·g材料鲜重)表示。
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