实验细胞中多糖和过氧化物酶的定位

实验细胞中多糖和过氧化物酶的定位

【实验目的】

掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。 【实验原理】

高碘酸—雪夫试剂反应简称PAS反应。主要是利用高碘酸作为强氧化剂这种强氧化剂能打开C-C键使多糖分子中的乙二醇变成乙二醛氧化所得到的醛基与Schiff试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类的多少有关。

细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色络合物根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存在。

PAS反应过程如下过氧化物酶联苯胺反应过程如下【实验仪器、材料和试剂】 一仪器显微镜、镊子、染色钵、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等二材料马铃薯块茎、洋葱根尖或洋葱鳞茎三试剂1高碘酸溶液高碘酸HIO4·2H2O0.4g95乙醇35mlM/5醋酸钠溶液2.72g醋酸钠溶于100mlH2O5ml蒸馏水10ml2Schiff试剂配法见Feulgen反应3亚硫酸水溶液配法见Feulgen反应470乙醇5联苯胺溶液在0.85盐水内加入联苯胺至饱和为止临用前加入20体积的H2O2每2ml加一滴。

60.1钼酸铵溶液称取0.1g钼酸铵溶于100ml0.85盐水【方法与步骤】 一细胞中多糖的测定高碘酸—雪夫PAS反应1把马铃薯块茎用刀片徒手切成薄片。

2浸于高碘酸溶液515min。 3移入70乙醇中浸片刻。 4Schiff试剂染色15min。

5亚硫酸溶液洗三次每次1min。 6蒸馏水洗片刻。 7装片镜检。

镜检结果细胞中多糖部位呈现紫红色见41。

二细胞中过氧化物酶的测定联苯胺反应1把洋葱根尖徒手切成2040μm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块。

2浸在溶有0.1钼酸铵的0.85盐水溶液中5min钼酸铵的作用是催化剂。 3浸在联苯胺溶液内2min至切片出现蓝色。 4在0.85盐水溶液中洗1min。

5将薄片置于载玻片上展开盖上盖玻片显微镜检查。 结果细胞中有蓝色沉淀出现见42。 【作业】

1简述PAS反应及联苯胺反应的原理。 2绘图示细胞中多糖及过氧化物酶的分布。