滚瓜烂熟总

7．植物体细胞杂交技术的优势（与有性杂交方法比较）

打破了不同种生物间的生殖隔离限制，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围 8．植物体细胞杂交技术的过程 人工诱导

去细胞壁 不同细胞原生质体 正在融合的原生质体 体细胞

再生壁 （组织培养） （愈伤组织 ） 杂种植株

1）去壁的常用方法： 酶解法：（纤维素酶、果胶酶）等 2）原生质体融合方法 物理法：（离心、振动、电刺激）等 化学法：（聚乙二醇 PEG）

9. 体细胞杂交后的染色体问题

两个不同种的二倍体体细胞（AA×DD）杂交后，染色体为（异源四倍体AADD） 1）两个同种个体做如下处理： 用（+）表示体细胞杂交 （×）表示有性生殖 1 2

2）两个不同种个体细胞 1 方法 二 × 二 将上述的（异源二）倍体染色体加倍 将上述的（异源二）倍体的花药离体培养 将上述的单倍体染色体加倍 2 二 + 二 将上述的（异源四）倍体花药离体培养 将上述的（异源二）倍体染色体加倍

2．1．2 植物细胞工程的实际应用 一、植物繁殖的新途径

1.微型繁殖

（1）微型繁殖技术：用于快速繁殖优良品种的（植物组织培养）技术。 （2）特点：① 保持优良品种的（遗传特性）；

② 高效快速地实现种苗的（大量繁殖）。

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方法 几倍体 二 × 二 二倍体花药离体培养 后代 能繁殖吗 能 不 （同源二）倍体 单倍体 后代 几倍体 （异源二）倍体 （异源四）倍体 单倍体 （异源四）倍体 （异源四）倍体 （异源二）倍体 （异源四）倍体 能繁殖吗 不能 能 不 能 能 不能 能 2.作物脱毒

（1）科学家发现植物（分生区 ）附近的病毒极少，甚至无病毒。目前采用（茎尖组织培养）技术来脱除病毒。 3.人工种子：

（1）特点：①后代无（形状分离）；②不受（季节，气候）和地域限制。 （2）结构：人工（种皮） + 人工胚乳和 （胚状体）等

二、作物新品种的培育 1.单倍体育种

（1）方法：(花药离体培养)。

（2）优点：（得到稳定遗传的优良品种）；（极大的缩短育种年限）。 2.突变体的利用

植物在（组织培养）的过程中，培养的细胞一直处于不断的（分生）状态， 容易受到（培养条件）和（外界压力）的影响而产生突变。 3.细胞产物的工厂化生产

（1）细胞产物种类：蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱等。 （2）生产技术：植物的(组织培养)技术。

2.2

动物细胞工程

2.2.1、动物细胞的培养和核移植

一．动物细胞的培养

1.概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，

让这些细胞生长和增殖。

2.过程： 步骤 措施 结果 1 （分散细胞） （胰蛋白酶）或（胶原蛋白酶）组织分散成为（单个细处理（组织块） 胞） 2 （制细胞悬液） 用（培养液）稀释 细胞被稀释 3 （原代培养） 将细胞悬液放在内表面（光滑无细胞贴壁，然后细胞接触毒）的培养瓶中培养 抑制 4 （传代培养） 贴满瓶壁的细胞重新用（胰蛋白同上 酶）等处理，再分瓶培养，继续增殖 传代培养的细胞一般传至（10）代就不容易传下去，一般来说在传至（10到50）代左右的时候，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，但继续培养的时候，少部分细胞克服细胞寿命的自然极限，获得（不死）性向着（癌细胞）细胞的方向发展 3.条件

（1）无菌、无毒的环境：培养液和所有的培养用具应进行(无菌 )处理。为了防止培养过程

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中的污染，在培养液中添加一定量的（抗生素），定期更换培养液的目的是（清除代谢产物，防止其对细胞自身造成危害）

（2）营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素，通常需加入（血

清）、（血浆）等天然成分。

（3）温度和pH：与动物的体温相近

（4）气体环境：主要有（95）%的空气和（5）%的CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2主要目

的（维持培养液的pH）。

4.应用： 1）．大规模生产有重要价值的生物（制品），如病毒疫苗、干扰素、单克窿抗体 2）．检测有关物质的（毒性） 3）．培养正常或病变细胞，用于（科研），如筛选抗癌药物等

5.比较动物细胞培养和植物组织培养 原理 培养基类型 培养基特别成分 培养目的 植物组织培养 动物细胞培养 细胞的全能性 细胞增殖 固体 液体 蔗糖、植物激素 快速繁殖，培育新品种和获得细胞产物 葡萄糖、动物血清、获得动物细胞和细胞产物等 促生长因子 二、动物细胞核移植技术和克隆动物 1.动物核移植

将动物的一个细胞的（细胞核），移入去核的（卵母细胞）中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终成为动物个体。 2.种类：（1）（胚胎细胞核）移植，（2）（体细胞）移植。 3.过程 1 2 3 4 5 6 7 物理或化学方法取供体的（体）细胞培养 供体细胞重组细胚胎移植 生出与供完胞发育细胞 （核）注入激活受体细胞，到（代孕体遗传基取（减Ⅱ中）期去核 去（核）的成（分裂和发育为（重组动物） 础相同的的卵母细胞 卵细胞 过程） 胚胎） 幼体 问题：动物细胞核移植技术的核供体细胞是（体细胞/胚胎细胞/卵细胞）

4.应用

（1）加快家畜（遗传改良）进程，促进优良畜群繁殖。 （2）保护（濒危物种）。 （3）生产（医用蛋白）。 （4）作为异种移植的（供体）。 （5）用于（组织器官）的移植。

(6) 更深入了解（胚胎发育及衰老）的过程 (7) 追踪疾病的（发展过程）和治疗疾病。 5.存在问题

（成功率低）、（克隆动物存在健康问题）、（食品安全问题）等。

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2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合（细胞杂交） 1 概念 （2）个或（多）个动物细胞结合形成（1）个细胞的过程 2 结果 形成具有（原来细胞遗传信息）的单核细胞即杂交细胞 3 诱导 灭活的病毒或PEG 4 意义 克服了（远源杂交）的不亲合性，成为研究（细胞遗传）、（细胞免疫） （肿瘤）和（生物新品种）培育的重要手段 比较 植物体细胞杂交 动物细胞融合 1 原理 （细胞膜的流动性、细胞全能性） （细胞膜的流动性） 2 方法 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 3 诱导方法 物理（离心、振荡、电刺激） 物理、化学方法（同左） 化学（聚乙二醇） 生物：（灭活的病毒） 4 用途 获得（杂种植株） 制备（单克隆抗体） 二、单克隆抗体 1.抗体：

（1）产生细胞：效应（T细胞） （2）成分： （蛋白质）

（3）特点：从血清中分离出的抗体产量（低）、纯度（低）、特异性（差）。 2.单克隆抗体的制备过程：

给小鼠注射特 从（脾脏）中分离 未融合细胞

灭活病毒融合 定的抗原蛋白 （ B淋巴细胞） （融合的B细胞）

（融合的瘤细胞） 培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 （杂交的瘤细胞）

体内培养 选择培养基

克隆、检测 （需要的杂交瘤细胞）） （单克隆抗体） 体外培养

（1）B淋巴细胞与骨髓瘤细胞放在一起，加融合剂后，出现的五种细胞： （未融合的B淋巴细胞）（未融合的骨髓瘤细胞）（融合的B淋巴细胞）（融合的骨髓瘤细胞）（杂交瘤细胞）

（2）杂交瘤细胞的特点：（迅速大量繁殖）.（产生足够数量的特定抗体） （3）单克隆抗体的特点（优点）：（特异性强）（灵敏度高），（能大量制备） 比较 目的 设备 原理 第一次筛选 将杂交瘤细胞与其它（四）种细选择培养基 淘汰不能生存的细胞分离 胞 第二次筛选 将（所需要的杂交瘤）细胞与其它细胞分开 第 16 页 共 21 页

多孔板 抗原—抗体的原理