实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应 - 图文

微生物实验

图4 V.P试验（从左到右依次是大肠杆菌、产气杆菌、未知菌） 4)．靛基质(吲哚)试验

现象：大肠杆菌黄色（即无变化），产气杆菌稍有红色，未知菌为红色。

分析：，说明大肠杆菌在葡萄糖蛋白胨水中代谢不产生乙酰基甲醇；产气杆菌产生了少量乙酰基甲醇；未知菌产生了较多乙酰基甲醇

注：V.P.试验一开始是没有现象的，最后把其他的试管都洗了后(这也是没有对照的原因)，我们重新滴加了边台的NaOH，然后用a-萘酚溶液处理，所以估计一开始没有现象的原因可能和KOH失效有关。

现象：吲哚试验中，未知菌没有变化；产气杆菌和大肠杆菌溶液表面产生了少量玫瑰红。

分析：未知菌无法分解色氨酸，产气杆菌和大肠杆菌可以分解色氨酸。

另外，对照组也出现了玫瑰红，照理说里面没有微生物分解蛋白胨中的色氨酸产生靛基质的话，是不会反应产生红色化合物的，估计试剂有污染，比如有含色氨酸酶的杂菌引入。

图5 吲哚试验（从左到右依次是对照、未知菌、产气杆菌、大肠杆菌） 5). 硫化氢试验：

图片不是很清晰，请见谅。

现象：硫化氢试验中，仅有变形杆菌产生了黑色物质。三只试管接种周围都有向外扩展现象。

分析：仅变形杆菌能分解含硫的氨基酸并产生硫化氢。三种菌均具有运动能力

图6 硫化氢试验（从左到右依次是对照、未知菌、变形杆菌、大肠杆菌） 6). 明胶液化试验

微生物实验

现象：明胶液化试验中，仅有未知菌使明胶在25℃以下液化

分析：仅未知菌可产生明胶酶

图7 明胶液化试验（从左到右依次是对照、未知菌、大肠杆菌、枯草杆菌） 7). 柠檬酸盐利用试验

现象：柠檬酸盐利用实验中，未知菌和大肠杆菌使培养基变黄；产气杆菌培养基变蓝。

分析：未知菌和大肠杆菌不能利用柠檬酸钠作碳源或在利用柠檬酸盐时产生了酸，产气杆菌在利用柠檬酸盐时产生了碱

图8 柠檬酸盐利用实验（从左到右依次是对照、未知菌、产气杆菌、大肠杆菌） 8). 淀粉水解试验

大肠杆菌 产气杆菌 枯草杆菌

未知菌 空白对照

变形杆菌

图9 淀粉水解实验

现象：淀粉水解实验中，除了未知菌外，所有菌均有变蓝的现象。

微生物实验

分析：未知菌分解了淀粉，其他菌无法分解或只能少量利用淀粉。

六、实验小结

这次实验重点是观察，而且要注意观察前的操作，比如明胶要观察必须先在4℃冰箱冷藏，拿出来后要尽快观察防止其在室温下融化；而吲哚试验要注意不要晃动，因为产生的玫瑰色靛基质本来就不多，如果剧烈晃动使之扩散开来的话，就基本上看不见了；V.P.试验是最纠结的，很多组在32℃下放了很久还是没有现象，我们开始认为是因为温度不够，可是加热也没有效果，于是考虑是不是试剂的问题，于是擅自用了实验室边台用于调pH的NaOH溶液，结果果然变红了。

七、思考

1. 接种后的明胶试管可以在37度培养，在培养后你必须采取什么措施才能证明液化的存在？

将明胶培养基放入4℃冰箱30min，仍不凝固说明明胶被试验细菌液化，为阳性。 2. 在吲哚试验和硫化氢产生试验中细菌各分解哪种氨基酸？

吲哚试验:含有色氨酸酶的细菌（如大肠杆菌、变形杆菌等）可分解色氨酸生成吲哚。 硫化氢试验：变形杆菌、乙型副伤寒杆菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。

3. 假设某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现怎样的结果？ 不产酸，产气。有机酸将被转化为非酸性末端产物，培养基呈黄色。葡萄糖发酵实验中，培养基颜色由紫变黄，杜氏小管中气体超过10%。

4. 通过哪些生理生化反应可以区分大肠杆菌和变形杆菌？

可以通过葡萄糖发酵实验、乳糖发酵实验、硫化氢实验来区分两者，大肠杆菌和变形杆菌都可以得到葡萄糖发酵实验的阳性反应，而只有大肠杆菌可以得到乳糖发酵实验的阳性反应，硫化氢实验中，变形杆菌能使培养基变成黑色。

八、参考文献

陈金春 微生物实验教程 清华大学出版社 2005年