半巢式RT—Realtime PCR检测南芥菜花叶病毒

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半巢式RT—Realtime PCR检测南芥菜花叶病毒

作者：粟智平 杨益娥 邓丛良 李金庆 王颖 段效辉 来源：《现代农业科技》2015年第18期

摘要 根据南芥菜花叶病毒（ArMV）外壳蛋白（CP）基因的保守序列，设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针，建立了半巢式RT-Realtime PCR检测ArMV的新方法。该方法有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术。第二步半巢式-RT-Realtime PCR既是对第一步信号的进一步放大，也是对第一步PCR产物的确认，因此，检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、Realtime PCR等方法高。结果表明：该方法检测灵敏度可达0.06 fg/μL植物总RNA。

关键词 南芥菜花叶病毒（ArMV）；半巢式RT-Realtime PCR；检测 中图分类号 S41-30 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）18-0145-03 Dectection of Arabis Mosaic Virus by Semi-Nested RT-Realtime PCR

SU Zhi-ping 1 YANG Yi-e 2 DENG Cong-liang 3 LI Jin-qing 1 WANG Ying 1 DUAN Xiao-hui 1

（1 Yantai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Yantai Shandong 264000； 2 Huitong County Agriculture Bureau of Hunan Province； 3 Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau）

Abstract Three nested primers and one TaqMAN probe were designed according to the CP gene of the Arabis mosaic virus，with which we set up a new method of semi-nested RT-Realtime PCR to detect the ArMV.The nest-PCR and the probe-detection technique were combined maneuverably in this study.The semi-nested RT-Realtime PCR in the second step could both magnify the sigal and validate the result of the first step，which could provide a more sensitive and specific detection of the ArMV.The sensitivity of the method could reach 0.06 fg/μL of total plant RNA.

Key words Arabis mosaic virus（ArMV）；Semi-Nested RT-Realtime PCR；dectection 南芥菜花叶病毒（Arabis mosaic virus，ArMV）可侵染植物约174属215种，主要危害黄瓜、马铃薯、胡萝卜、樱桃、葡萄、草莓、大豆、菜豆等经济作物。其地理分布极广，在五大洲30余个国家有发生，属于世界性病害[1]。在我国未见该病毒危害的报道，是我国对外重要