乙型病毒性肝炎诊断标准

i)显色：每孔加入显色剂A、B液各l滴(50μL)，轻轻振荡混匀.37℃避光显色15min。

j)测定：每孔加入终止液l滴(50μL)，轻轻振荡混匀，

设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），用空白孔调零点后测定各孔OD值。 结果判断：

a)临界值(CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔00均值×

2.1。（阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算） b)阳性判定：样品0D值≥临界值(C U'TOFF)者判阳性。 c)阴性判定：样品OD值<临界值(CUTOFF)者判阴性。 A.1.4 检测抗-HBe

ELJSA竞争抑制法检测步骤：

a)配液：将30mL浓缩洗涤液(20×)用蒸馏水或去离子水稀释至600ml备用。

b)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应没阴、阳性

对照各2孔和空白对照l孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。

c)加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50μL。

d)加酶：每孔加人酶标试剂1滴（50μl.），轻轻振荡混匀。

e)温育：用封板膜封板后置37℃温育60min。 f)洗涤：将孔内液体吸干，用洗涤液注满各孔，静置1min后吸干，重复洗涤5次，拍干。

g)显色：每孔加入显色剂A.B液各l滴(50μL)，轻轻振荡混匀37℃避光显色15min。

h)测定：每孔加入终止液1滴(50μL)，轻轻振荡混匀，

设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450/630nm检测）、用空白孔调零点后测定各也孔OD值。 结果判断：

a)临界值(CUTOFF)计算：临界值＝阴性对照孔OD均值×0.5。

b)阳性判定：样品0D值≤临界值(CUTOFF)者判阳性。 c)阴性判定：样品OD值>临界值(CUTOFF)者判阴性。 A.1.5检测抗-HBc

ELISA竞争抑制法检测步骤：

a)配液：将30mL浓缩洗涤液(20×)用蒸馏水或去离子水稀释至600mL备用。

b)编号.：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴、阳

性对照各2孔和空白对照l孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。

C)加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50μL.。

d)加酶：每孔加入酶标试剂l滴(50μL)，轻轻振荡混匀。

e)温育：用封板膜封板后置37℃温育60min。 f)洗涤：将孔内液体吸干，用洗涤液注满各孔，静置1min后吸干，重复洗涤5次，拍干。

g)显色：每孔加人显色剂A、B液各l滴(50μL)，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15min。

h)测定：每孔加入终止液l滴(50μL)，轻轻振荡混匀。

设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），用空白孔凋零点后测定各孔OD值。 结果判断：

a)临界值(CUTOFF)计算：计算值＝阴性对照孔OD均值×0.5。

b)阳性判定：样品OD值≤临界值,（CUTOFF）者判阳性。

c)阴性判定：样品OD值＞临界值，（CUTOFF）者判阴性。

A.1.6 检测抗-HBc IgM ELISA捕获法检测步骤：

a)配液：将待测血清用生理盐水泳l：100稀释，浓缩

洗涤液用蒸馏水稀释至500mL( 48T)或750mL(96T)备用。 b)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴、阳性

对照各2孔和空白对照l孔（空白对照加入100μL洗涤液）。

c)加样：取出已包被板，分别在相应孔应加入已稀释待测血清或阴、阳性对照100μL。

d)温育：用封板膜封板后置37℃温育60min。 e)洗涤：吸去板内液体，用洗涤液注满各孔，静置1min后吸干，重复洗涤5次，拍干。

f)加酶及抗原：每孔加入酶标记物及抗原各50μL（加空白孔不）。

g)温育：振荡1min后，于37℃温育30min。

h)洗涤：温育后，吸去板内液体，同上洗涤5次，吸干。