双黄连口服液的 制备 成分检测

双黄连口服液

拼音名：Shuanghuanglian Koufuye 书页号：X9-4 标准编号：WS3-131(Z-43)-95(2) 批准文号：（91）卫药准字Z-83-2号 （91）卫药准字Z-83-3号 本品为金银花、黄芩、连翘等药味经加工制成的口服液。 【性状】 本品为棕红色澄清液体；味甜、微苦。

【鉴别】 取本品1ml,加水5ml，摇匀，作为供试品溶液。另取连翘对照药材0.5g,加75％乙醇10ml,振摇提取1小时，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取黄芩甙、绿原酸对照品，分别加75％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1990年版一部附录57页)试验，吸取上述四种溶液各1～2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜(5×7cm)上,以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与黄芩甙、绿原酸对照品及连翘对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】 相对密度 应不低于1.12(中国药典1990年版一部附录34页)pH值，应为5.0～7.0(中国药典1990年版一部附录40页)。

其他 应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典1990年版附录15页)。

【含量测定】 精密量取本品1ml，置25ml量瓶中,加甲醇适量,置热水中充分振摇,放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，放置，取上清液作为供试品溶液。另取黄芩甙对照品， 加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1990年版一部附录57页)试验。吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜(14×17cm)上,以醋酸为展开剂,展开，取出，晾干。照色谱法(中国药典1990年版一部附录55页薄层扫描法)进行扫描,波长：λS＝275nm，λR＝400nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。 本品含黄芩以黄芩甙(C12H18O11)计，不得少于0.8％。

【功能与主治】 辛凉解表，清热解毒。用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。 【用法与用量】 口服，一次20ml，一日3次，小儿酌减或遵医嘱。 【规格】 每支10ml

【贮藏】 密封，避光，置阴凉处。 【使用期限】 二年

一种用于生产浓缩型双黄连口服液制剂的制备方法，制剂中主要含有金银花、黄芩、连翘三种药材。制备时，主要采用的是现代分离、精制技术，采用酸沉、醇沉、利用不同pH调节、萃取、高速离心等方法，且对药料的深度加工，使药料的有效成分能够得到充分利用，药物浓度增大、有效成分含量提高；缩短生产周期，降低生产成本。因为有效成分含量提高、单位体积内有效浓度增加，其口服用量相应减少，使服用、携带更方便。

1、一种用于生产浓缩型双黄连口服液的制备方法，其特征在于：它依次包括以下工艺步骤： (a)将黄芩切片后加入8-10倍量水煎煮1.5-2.5小时，滤过，药渣再加5-6 倍量水煎煮二次，各0.5-1小时，滤过，合并三次滤液，滤液浓缩并在80℃时加入盐酸溶液适量调节PH值至3以下，保温1小时，放置过夜，将下部沉淀加6～8 倍量水搅匀，用40％氢氧化钠溶液调节PH值至6-8，再加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用浓盐酸调节PH值至1-3，在60℃保温30

分钟后放置过夜，滤过，沉淀用乙醇洗至PH值6-8，挥尽乙醇得黄芩粗提取物；再用4-6倍量水混悬，调节PH值至6-8，搅拌至溶解，并加入黄芩粗提取物量2-5％活性炭，搅拌，在 80℃以上保温30-40分钟，过滤，滤液加入稀盐酸，PH值调至6-8，在搅拌下加入等量95％乙醇，抽滤，用盐酸调至2-4，60℃保温30-40分钟，放置过夜，经抽干得到精制黄芩苷提取物。 (b)金银花、连翘加入10-14倍量水温浸半小时后，加热至沸腾，微沸保持 1-2小时，过滤得滤液，药渣再加6-8倍量水微沸保持1-1.5小时，得滤液，弃去药渣；合并两次滤液，蒸发浓缩至相对密度为1.20～1.25(在70～80℃条件下测)，放冷，在搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达65-75％，置冷藏室内静置24-48小时，滤取上清液，残渣加乙醇适量，搅匀，静置24小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味后放出，得金银花、连翘粗提取物；再用一定量的正丁醇分3-4 次进行萃取，收集正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，得精制金银花、连翘提取物。 (c)按配方量将精制黄芩苷提取物、金银花、连翘提取物混合，并加水适量，搅拌至均匀，以40％氢氧化钠溶液调节PH值至7-8，搅匀，放置冷藏罐内，在4～8℃条件下冷藏72小时，之后通过高速离心方式除杂，离心液加入溶解过滤后的蔗糖适量，搅拌，再加入香精适量并调节PH值至6.5-7.5，加水制成总量，灌装，灭菌，即得。 【摘要】 目的 采用HPLC法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量。方法 采用十八烷基键合硅胶为固定相；甲醇∶水∶冰乙酸(60∶50∶1)为流动相；流速1.0ml/min；检测波长274nm。结果 黄芩苷在25～220μg范围内呈良好线性(r=0.9995)；平均回收率100.59%，RSD为1.02%(n=9)。结论 本法快速准确，杂质分离完好，重现性好，可用于该制剂中黄芩苷的含量测定。 【关键词】 高效液相色谱法；黄芩苷；双黄连口服液

双黄连口服液处方中含金银花、黄芩和连翘，具有辛凉解表、清热解毒之功效，用于治疗外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛之症状。中国药典［1］采用HPLC法测定双黄连口服液中黄芩苷含量作为控制制剂质量的指标，结果样品黄芩苷峰与杂质峰无法完全分离(图1)。本文通过改变流动相比例测定，结果分离效果好，快速准确，重现性好，可用于本制剂的质量控制。 1 仪器与试药

1.1 仪器 美国SSI Ⅳ型液相泵，M525紫外检测器，Anastar色谱工作站；赛多利斯BP-211D电子天平。

1.2 试药 黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号200512)；双黄连口服液(哈高科白天鹅药业集团有限公司，批号05117-1；江苏吴中实业股份有限公司苏州长征制药厂，批号050114；中国黑龙江完达山制药，批号050301)；甲醇(色谱纯)、冰乙酸(AR)，重蒸水。

图1 药典流动相样品的HPLC色谱图2 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱(5μm，250mm×4.6mm)；流动相：甲醇：水：冰乙醇(60：50：1)；流速1.0ml/min；检测波长274nm，柱温40℃。 3 试验方法和结果

3.1 对照品液的制备 精密称取黄芩苷对照品20.60mg，置200ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得。 3.2 标准曲线 精密吸取上述对照品溶液0.25ml，0.50ml，0.75ml，1.00ml，1.25ml，1.50ml，1.75ml，2.00ml，置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度。进样20μl，记录色谱图(图2)。以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制回归方程：Y=6535.7X+9508(r=0.9995)，结果黄芩苷在25～220μg范围内呈良好的线性关系。

图2 改进流动相后对照品的HPLC色谱图

3.3 精密度试验 分别精密进对照品溶液20μl，重复进样6次，按上述色谱条件记录峰面积，结果RSD%=0.89%。

3.4 样品分离度 按样品测定法制备供试液进样20μl，记录色谱图(图3)，结果峰与相邻杂质峰分离完全，分离度≥2.5。

3.5 重现性试验 取同一批样品(05117-1)，按样品测定法制备供试液，在上述色谱条件下进行5次平行测定，结果RSD=1.56%，表明本法测定的重现性好。 3.6 稳定性试验 取批号05117-1的供试品溶液，分别在制备后0，2，4，8，12h测定，结果黄芩苷的峰面积RSD=1.82%，表明溶液基本稳定。

3.7 阴性干扰实验 取阴性对照样品(按《中国药典》2000版一部缺黄芩苷制剂)，精密进阴性对照品溶液20μl，按上述色谱条件记录色谱图(图3)。结果黄芩苷对照品相应无干扰峰出现，说明处方中其他成分对测定结果无干扰。 图3 改进流动相后阴性对照的HPLC色谱图

3.8 回收率试验 采用加样回收法。精密量取已知含量的样品1ml，置50ml量瓶中，分别精密加入浓度为10.30mg/ml；黄芩苷对照品溶液1ml，2ml，3ml，加50%甲醇稀释至刻度。进样20μl，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率试验结果

3.9 样品测定 精密量取各样品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20min，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用45μm液膜过滤，滤液即为供试品溶液，在上述色谱条件下，进样20μl，记录峰面积(图4)，计算黄芩苷含量，结果见表2。

图4 改进流动相后样品的HPLC色谱图表2 双黄连口服液含量测定结果 4 讨论

本法测定双黄连口服液的黄芩苷的含量，操作简单易行，以甲醇：水：冰乙酸(60：50：1)为流动相，样品中黄芩苷与杂质峰完全分离，出峰时间短，峰形稳定，进样量在20～220μg范围内呈良好线性，回收率高且稳定，可以选定上述色谱条件的流动相，作为该制剂黄芩苷的含量测定。 【参考文献】

1 国家药典委员会.中国药典.北京：化学工业出版社，2000，418-419. 2 周玉新.中药指纹图谱研究技术.北京：化学工业出版社，2002，8. 【关键词】 HPLC 【摘要】 目的 建立测定双黄连口服液和败毒颗粒剂中绿原酸含量的方法。 方法 采用高效液相色谱法，在十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱上，以乙腈:0.1%磷酸（13:87）为流动相，检测波长为327nm。 结果 绿原酸含量在（17.84～89.20）μg/ml范围与色谱峰面积线性关系良好（r=0.9999）。双黄连样品加样回收率为99.1%～104.3%（RSD=2.02%，n=5）;败毒颗粒样品加样回收率为100.2%～103.7%（RSD=1.72%，n=5）。 结论 测定双黄连口服液、败毒颗粒中绿原酸含量，方法简便、快速、精密度及回收率均较好，可用于双黄连口服液、败毒颗粒中绿原酸的含量测定和产品质量控制。

【关键词】 绿原酸 HPLC法 双黄连口服液 败毒颗粒 含量测定

绿原酸（Chlorogenic acid）为多种中草药的有效成分，具有抗菌消炎、抗氧化、抗细胞衰老，对消化道的癌症有明显抑制作用和调节机体免疫功能的作用 ［1］ 。还具有增色和护色作用，可用于食品、果品保鲜等 ［2］ 。双黄连口服液为中药黄芩、金银花和连翘的提取物 ［3，4］ ，其中除黄芩苷外，绿原酸

也是主要成分之一，在《中国药典》、《中国兽药典》中尽管未提及含量要求，但其重要性并不亚于黄芩苷，也可作为产品质量控制的另一指标之一;福建金谷科技开发有限公司生产的败毒颗粒，主成分也是绿原酸。为此，建立这2种产品中绿原酸有效的监测方法，对产品质量的控制具有重要指导意义。HPLC法测定绿原酸含量已有不少报道 ［5～8］ ，但由于不同的中药制剂，成分差异很大，测定条件也变化较大。笔者在前人工作的基础上，对HPLC法测定复方中成药中绿原酸含量进行了进一步探索，并用于测定双黄连口服液、败毒颗粒产品中绿原酸的含量，效果良好，可作为双黄连口服液、败毒颗粒产品质量控制的检测方法。 1 仪器与试剂

1.1 仪器 Water高效液相色谱仪;Water1525二元泵;Water2487紫外检测器;色谱柱:Symmertry十八烷基键合硅胶柱（Water公司）;BS201S电子天平（北京塞多利斯天平有限公司）;ShloA快速水分测定仪（上海第二天平仪器厂）;数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂 乙醇、甲醇、磷酸等均为分析纯试剂，乙腈为色谱纯;绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所提供）;水为双蒸水;双黄连口服液、败毒颗粒（福建金谷科技开发有限公司提供）。 2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:SymmetryC 18 4.6×75mm（Waters公司）;流动相:乙腈:0.1%磷酸=13:87;检测波长328nm;流速1ml/min;柱温25℃;理论塔板数不低于2300，进样量5μl。

2.2 对照品溶液的配制 精密称取绿原酸对照品4.46mg，用甲醇溶解并定溶于25ml容量瓶中，配成178.4μg/ml的对照品储备液。 2.3 样品溶液的制备

2.3.1 双黄连口服液样品溶液 精密量取双黄连口服液2.0ml，置100ml锥形瓶中，加乙醇50ml，50℃下超声提取30min，滤过，滤液置100ml容量瓶中定容，得样品溶液1。

2.3.2 败毒颗粒样品溶液 称取败毒颗粒样品2.00g，加入50ml甲醇，50℃下超声提取30min，滤过，将滤液用甲醇定容至100ml，得样品溶液2。

2.4 标准曲线绘制 分别精密移取1，2，3，4，5ml对照品储备液，用甲醇定容至10ml，配成17.84、35.68、53.52、71.36、89.20μg/ml的标准溶液，精密吸取5μl注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，以绿原酸峰面积（Y）对相应的浓度（X）进行线性回归，回归方程为:Y=1.63×10 4 X-2.24×10 4 。回归系数R=0.9999（n=5），线性范围17.84～89.20μg/ml。

2.5 进样精密度试验 精密量取5μl35.68μg/ml的对照品溶液进样，连续5次，记录峰面积，如556932、550781、560829、554352、558907，平均值为556360，RSD为0.7%，可见进样精密度良好。 2.6 样品测定

2.6.1 样品色谱图 精密量取对照品溶液、样品溶液1、样品溶液2各5μl进样，记录色谱图，如图1所示，样品中绿原酸色谱峰能与样品内源性物质很好分离，保留时间为2.3min。

图1 对照品、样品色谱图 A-对照品;B-样品溶液1;C-样品溶液2

2.6.2 样品溶液稳定性试验 精密吸取“2.3.1”项下的样品溶液5μl，2.5h进样1次。共测6次，峰面积分别为856943、854349、857684、850927、856366、850813，平均峰面积为854514，RSD为0.66;依同样的方法，测定”2.3.2”项下的样品溶液，