浙江专用2020年高考生物二轮复习专题八生物技术实践第17讲微生物的利用与酶的应用教案

(10)进入无菌室，首先打开超净台上的紫外灯和过滤风，然后在酒精灯的火焰旁制备固体平面培养基( × ) 2．酶应用的正误判断

(1)将果胶酶用于果汁生产，既能提高果肉的出汁率又能提高果汁的澄清度( √ ) (2)酶的活性受温度、pH和酶用量等因素的影响( × ) 提示 酶用量不影响酶的活性。

(3)果胶起着将植物细胞粘合在一起的作用，它溶于乙醇( × ) 提示 果胶不溶于乙醇。

(4)用固定化α-淀粉酶进行淀粉水解实验时不需考虑温度( × ) 提示 温度影响酶的活性。

(5)固定化α-淀粉酶可永久使用( × ) 提示 固定化酶能够重复使用，但不是永久使用。

(6)α-淀粉酶固定化实验结束后，将固定化柱放在常温下即可( × ) 提示 固定化柱应低温保存。

(7)固定化酶是通过物理或化学的方法将非水溶性的酶固定在某种介质上，使之成为可重复使用的酶制剂( × )

(8)鉴别果胶最简便的方法是加入95%的乙醇( √ )

(9)果胶酶常存在于动物细胞，用于消化纤维素等营养成分( × )

(10)制备固定化酶柱时，用10倍体积蒸馏水洗涤的目的是洗去未吸附的α-淀粉酶( √ )

考向一 考查微生物的利用

1．(2019·浙江名校协作体高三联考)请结合以下酵母菌在人类生产生活中的实际应用，回答下列问题：

(1)为了筛选出符合要求的酵母菌，科研人员在培养基中添加了青霉素，其目的是_________；为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同的平板上划线，以获得单菌落。 下图所示的划线分离操作中，正确的是________。科研人员发现其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是________________________________________________。

(2)酿酒和制醋是古老的生物技术，与此生产有关的微生物分别是酵母菌和______________。以果汁为原料经发酵制作醋的过程中，首先酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵；然后相关菌种在________条件下将上述发酵产物转变为醋酸。

答案 (1)抑制细菌生长 B 接种环温度过高，菌被杀死 (2)醋化醋杆菌 有氧

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解析 (1)为了筛选出符合要求的酵母菌，科研人员在培养基中添加了青霉素，其目的是为了抑制细菌的生长。划线分离操作中，下一次划线要在上一次划线末端处开始。若其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是接种环温度过高，菌被杀死。(2)与酿酒和制醋有关的微生物分别是酵母菌和醋化醋杆菌。以果汁为原料经发酵制作醋的过程中，首先酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵；然后醋化醋杆菌在有氧条件下继续将上述发酵产物转变为醋酸，醋化醋杆菌是好氧生物。

2．(2019·浙江超级全能生9月联考)食品安全国家标准中有奶粉可能含有的细菌克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的检测标准，其流程如图，请回答：

①增菌：检样100g＋BPW适量

↓36±1℃，18±2h

②选择培养：1mL增菌液＋mLST－Vm10mL

↓44±0.5℃，24±2h

③显色培养

↓36±1℃，24±2h

挑取疑似菌落

↓ ④TSA培养

↓25±1℃，48±4h

挑取黄色菌落

↓

⑤生化指标精细鉴定

↓ ⑥报告

注释 a．一般奶粉中含有的细菌较少，BPW属于增菌培养基。

b．mLST－Vm培养基：氯化钠、胰蛋白胨、乳糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、十二烷基硫酸钠、蒸馏水、万古霉素。

c．克罗诺杆菌属及少数其他细菌能在③显色培养基上呈现较浅的蓝绿色。 d．TSA培养基：胰蛋白胨、植物蛋白胨、氯化钠、蒸馏水等。 e．克罗诺杆菌属还有许多生化指标需要精细鉴定，最终生成报告。

(1)过程中的BPW培养基为________(填“固体”“液体”或“半固体”)培养基。 (2)②选择培养时，mLST－Vm培养基中添加的万古霉素是一种抗生素，分析可得，克罗诺杆

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菌属对该抗生素________(填“敏感”或“不敏感”)。

(3)由于②的培养产物细菌浓度未知，为避免对其进行稀释的工作，从②转移至③培养时，需采用的接种方法为____________。③过程所需的显色培养基在制备时的次序是________。 A．调节pH B．称量药品 C．溶解 D．倒平板 E．灭菌

(4)克罗诺杆菌属能产生黄色素，积累到一定量的时候，可使整个菌落呈现黄色，故TSA培养后要挑取黄色菌落，除注释中的成分外，TSA培养基中还应包含________。

(5)食品安全关系每个人的生命，对一种细菌的鉴定程序也相当严格。在上述检测程序中，步骤____________(填序号)对克罗诺杆菌属具有一定的选择或鉴定作用。

答案 (1)液体 (2)不敏感 (3)划线分离法 BCAED (4)琼脂(或琼脂糖) (5)②③④⑤(缺一不可)

解析 (1)BPW培养基为增菌培养基，即用于扩大培养，为液体培养基。(2)本实验的最终目标是筛选出克罗诺杆菌属，因此步骤②中的万古霉素需要将克罗诺杆菌属保留下来，并尽可能多地杀灭其他杂菌，因此克罗诺杆菌属对万古霉素不敏感。(3)检测样品中细菌数量不确定，经过①②培养后，菌液中的密度大小不确定，若采用涂布分离法，需要一个合适的稀释浓度，这样不符合题意，因此可采用划线分离法，接种环在平板上划线到末端时，一般可形成单菌落；制备培养基的流程为BCAED。(4)在TSA培养基上要挑取菌落，可见TSA培养基是固体培养基，因此在配方中还应添加琼脂或琼脂糖。(5)国家安全标准相当严格，上述流程中的②③④⑤在一定程度上都对克罗诺杆菌属进行选择或鉴定，以确保检测的准确性。 考向二 考查酶的利用

3．(2019·浙江4月选考节选)回答与果胶和果胶酶有关的问题：

(1)通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还因为 ________________________________________________________________________。 (2)为了获得高产果胶酶微生物的单菌落，通常对分离或诱变后的微生物悬液进行________。 (3)在某种果汁生产中，用果胶酶处理显著增加了产量，其主要原因是果胶酶水解果胶使______________________________。果汁生产中的残渣果皮等用于果胶生产，通常将其提取液浓缩后再加入___________使之形成絮状物，然后通过离心、真空干燥等步骤获得果胶制品。 (4)常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有______________________和可连续处理等。在建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的主要有________________和____________________。 答案 (1)腐烂的水果中含产果胶酶的微生物较多

(2)涂布分离(或划线分离) (3)水果组织软化疏松及细胞受损 95%乙醇 (4)提高果胶酶的稳定性 固定化的方法 固定化所用的介质

4．(2019·浙江丽衢湖9月联考)回答下列“果汁中的果胶和果胶酶”的相关问题： (1)自制的果汁很浑浊，主要是含有大量杂质，杂质的主要成分是________，可用________

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检测。市售果汁为达到澄清透明且不降低品质的要求，常用______________处理。 (2)市售果汁在制作过程中要进行灭菌，灭菌是指使用强烈的理化因素杀死_______________。不同的物质灭菌方式有所区别，如葡萄糖，为防止__________________，要用500g/cm压力(90℃以上)灭菌30min，而尿素只能用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌，原因是________________。 (3)果汁饮料要求细菌总数≤100个/mL，大肠杆菌数＜3个/100mL。为了检测某成品受细菌污染情况，需要培养和计数，其中所用的细菌分离方法是______________。 答案 (1)果胶 乙醇 果胶酶(或果胶酶和果胶甲酯酶)

(2)(物体内外)所有的微生物 葡萄糖分解碳化 尿素加热会分解 (3)涂布分离法 解析 (1)果汁中因为含有大量的果胶而显得浑浊，果胶不溶于乙醇，可以用乙醇来对其进行检测，这是简便的鉴定方法。为了去除果胶又不影响果汁质量，可以用果胶酶或果胶酶和果胶甲酯酶处理。(2)灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物。不同的物质灭菌方式有所区别，如葡萄糖，为防止葡萄糖被分解碳化，要用500 g/cm压力(90 ℃以上)灭菌30 min；而尿素因为加热会分解，所以只能用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌。(3)对饮料中的细菌进行培养和计数要用活菌计数法，即涂布分离法。

1．(2019·全国Ⅰ，37)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。 Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5g/L)。

Ⅱ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15g/L)。 Ⅲ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45g/L)。 回答下列问题：

(1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是__________________。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是________。

(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会____________，其原因是_________________________________________________________。 (3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是__________________。

(4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供________和__________________。

答案 (1)牛肉膏、蛋白胨 X (2)下降 不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖 (3)涂布分离法 (4)能量 合成其他物质的原料

解析 (1)牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏、蛋白胨为微生物生长提供了氮源，而Ⅱ号、Ⅲ号培养基中除X外的其他物质均不含碳，所以能为微生物提供碳源的有机物是X。(2)因为Ⅱ号培养基中碳源只有X，属于选择培养基，只有能降解X的细菌才能增殖，而不能降解X的细

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