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挥发性脂肪酸总量的比色测定法 一、 实验原理
含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯与羧胺反应，形成氧肟酸。在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物——挥发性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法测定。 二、 实验仪器
容量瓶、吸量管、比色管、分光光度计 三、 实验试剂
? 1：1硫酸：浓硫酸（相对密度1.84，C.P.）加到同体积蒸馏水中稀释配
制。
? 酸性乙二醇试剂：取30.0mL乙二醇(C.P.)与4.0mL配制的稀硫酸混合。 ? 4.5mol/L的氢氧化钠：称取18g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水
稀释至100ml。
? 10%盐酸羟胺溶液：称取盐酸羟氨10.0g，溶于100mL蒸馏水中。 ? 羟胺试剂：量取40.0 mL4.5mol/L的氢氧化钠，与10.0mL10%的硫酸羟
胺相混合。
? 酸性氯化铁试剂：将20.0g分析纯FeCl3 ·6H2O溶于500mL水中，准确
加入20.0 mL浓硫酸，并以蒸馏水稀释至1L。 ? 乙酸标准液的配制。精确称取乙酸（分析纯，相对密度1.045，含量99.5%）
1.0050g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。
四、 颜色实验
取10ml乙酸标准液于50ml比色管中，并定容。 吸取0.5mL样液置于比色管中，准确加入1 mL酸性乙二醇试剂，充分混合，于沸水浴中加热3min，应避免试管与加热器壁直接接触。
然后立即将试管置于冷水中冷却。加入2mL羟胺试剂，并混匀，放置1min。 然后各个管中加入10mL酸性氯化铁试剂，用蒸馏水定容到25mL，并充分摇匀，静置5min。观察其现象。
比色管中有棕红色络合物产生，故试剂正常，颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物的含量成正比，故可用比色法测定挥发性脂肪酸。 五、 实验步骤
(1)乙酸标准曲线绘制：
准确吸取10 mg/mL乙酸标准溶液0.5mL、1mL、3mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL、12.0mL、15mL，分别置于50.0mL比色管内，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得0.1、0.2、0.6、1.0、1.6、2.0、2.4、3.0mg/mL的乙酸标准系列液。
吸取0.5mL样液置于比色管中，准确加入1 mL酸性乙二醇试剂，充分混合，于沸水浴中加热3min，应避免试管与加热器壁直接接触。
然后立即将试管置于冷水中冷却。加入2mL羟胺试剂，并混匀，放置1min。 然后各个管中加入10mL酸性氯化铁试剂，用蒸馏水定容到25mL，并充分摇匀，静置5min，用分光光度计以500nm波长测定光密度。
同样操作做空白试验1份。
乙酸标准曲线0.20.15y = 0.0567x + 0.008R2 = 0.9999系列1线性 (系列1)线性 (系列1)吸光度0.10.050012浓度（mg/ml）34
（2）样品处理：使用大气采样器吸取经过大约一星期发酵后的橡胶所产生的气体，用10ml蒸馏水收集，置于容量瓶中。同上述操作进行实验，并观察其变化。
从左到右依次为：样品溶液、3mg/ml乙酸溶液、2.4mg/ml乙酸溶液、2mg/ml乙酸溶液、1.6mg/ml乙酸溶液、1.0mg/ml乙酸溶液、0.6mg/ml乙酸溶液、0.2mg/ml乙酸溶液、0.1mg/ml乙酸溶液、空白比色管 颜色对比：前排为样品
K0=0.0080 K1=0.0567 A=K0+K1*C
R2=0.9999
A=0.0080+0.0567*C
浓度(mg/ml)00.10.20.611.622.43样品吸光度0.0080.0140.020.0420.0640.0980.1210.1440.1790.01
样品浓度：C=0.035mg/ml
所得的样品中的挥发性脂肪酸浓度低，疑似样品中含有氨氮。
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