白藜芦醇对糖尿病下肢缺血大鼠氧化应激和血管新生的作用

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实用医学杂志２０１５年第３１卷第５期

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白藜芦醇对糖尿病下肢缺血大鼠氧化应激和

血管新生的作用

韩敦正

汤穆浛

邢晓雯

陆冬晓

摘要目的：初步探讨白藜芦醇对糖尿病下肢缺血大鼠氧化应激和血管新生的影响。方法：ＳＤ大鼠５０只，雌雄各半，随机分为５组：假手术组、下肢缺血组、糖尿病组、糖尿病下肢缺血组及白藜芦醇治疗组。建立动物模型，白藜芦醇治疗组在建立糖尿病下肢缺血模型后连续１４ｄ给予白藜芦醇腹腔注射２０ｍｇ／ｋｇ。ＨＥ染色测定各组左下肢骨骼肌中毛细血管密度（ＭＶＤ），运用酶联免疫吸附法测定８－羟基脱氧鸟苷（８-ＯＨｄＧ）、内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）的活性。结果：下肢缺血大鼠ＭＶＤ及８-ＯＨｄＧ蛋白表达明显升高、ｅＮＯＳ蛋白表达明显降低（Ｐ＜０．０１）；糖尿病下肢缺血组与下肢缺血组比较，ＭＶＤ及ｅＮＯＳ蛋白表达降低，８-ＯＨｄＧ表达升高（Ｐ＜０．０１）；而白藜芦醇治疗组与糖尿病下肢缺血组比较，ＭＶＤ及ｅＮＯＳ表达量均增高，８-ＯＨｄＧ表达量下降（Ｐ＜０．０５）。结论：白藜芦醇治疗可减轻糖尿病下肢缺血时的氧化应激，促进外周微血管新生。

关键词白藜芦醇；糖尿病下肢缺血；氧化应激

外周血管疾病是临床常见的糖尿病并发症，１．２糖尿病模型制备大鼠禁食１２ｈ，分别于１、可导致大血管闭塞和微循环障碍，严重病变常见３ｄ给予ＳＴＺ（以０．１ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ４．４柠檬酸缓冲于下肢如糖尿病足等，大大降低了患者的生活质液配置）１０及５０ｍｇ／ｋｇ腹腔注射，以３ｄ后测定空量。白藜芦醇是一种多酚类植物抗毒素，具有调腹血糖≥１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ为造模成功。血糖不达标者节脂质代谢、舒张血管、抗炎及抗血小板聚集、抗３ｄ后补充ＳＴＺ溶液２０ｍｇ／ｋｇ，仍不达标则剔除。肿瘤等多种生物学作用［１］。本实验旨在通过观察造模过程中出现死亡大鼠按同样方法补充。

白藜芦醇对糖尿病大鼠缺血下肢中８－羟基脱氧１．３下肢缺血模型制备１０％水合氯醛以０．３鸟苷（８-ＯＨｄＧ）、内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）蛋白ｍＬ／１００ｇ剂量腹腔注射麻醉大鼠。分别切开左下表达的作用，初步探讨白藜芦醇对糖尿病下肢缺肢近腹股沟区及腘窝皮肤，双线结扎并剪断股动血大鼠缺血下肢氧化应激与微循环的影响。

脉、腘动脉及其明显分支，缝合皮肤。

１材料与方法

１．４新生微血管密度（ＭＶＤ）测定取左下肢骨骼肌组织，常规固定、脱水、包埋，制作石蜡切片行１．１实验动物雄性ＳＤ大鼠５０只（广东省医学ＨＥ染色。双盲法２００倍视野下计算毛细血管数，实验动物中心），体重２２０～２７０ｇ，随机分为５组：管腔有较厚肌层者不计数，结果以每视野微血管假手术组、下肢缺血组、糖尿病组、糖尿病下肢数表示。

缺血组及白藜芦醇治疗组。其中下肢缺血组以生１．５酶联免疫吸附法测定８-ＯＨｄＧ、ｅＮＯＳ的活理盐水代替链脲佐菌素（ＳＴＺ，上海锐谷生物科性取左下肢骨骼肌组织剪成１ｍｍ３的小块，加入技有限公司）进行腹腔注射，再建立下肢缺血模生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆（２５００ｒ／ｍｉｎ，型；糖尿病组先建立糖尿病模型，后行假手术；１０ｍｉｎ），取上清液。按照试剂盒（购自南京建成糖尿病下肢缺血组先建立糖尿病模型再建立下生物工程研究所）说明进行大鼠ｅＮＯＳ及８-ＯＨｄＧ肢缺血模型；白藜芦醇治疗组按糖尿病下肢缺血检测。

组方法建立糖尿病下肢缺血模型后以白藜芦醇１．６统计学处理用ＳＰＳＳ１３．０统计软件分析数（阿拉丁公司）按２０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）剂量连续腹腔注据，数据以ｘ±ｓ表示，多组间比较采用方差分析。

射１４ｄ。

２结果

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６-５７２５．２０１５．０５．００９

２．１ＨＥ染色检测左下肢骨骼肌中ＭＶＤ值下基金项目：广东省医学科研基金项目（编号：２０１１Ｂ０３１８０００-７１）肢缺血组骨骼肌在缺血缺氧状态下ＭＶＤ比假手作者单位：５１０１２０广州医科大学附属第一医院心血管内科术组明显上升（Ｐ＜０．０１）；而与下肢缺血组对比，通信作者：陆冬晓

Ｅ-ｍａｉｌ：ｌｕｄｏｎｇｘｉａｏ６８＠１２６．ｃｏｍ

糖尿病下肢缺血组ＭＶＤ则明显降低（Ｐ＜０．０１）；白

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实用医学杂志２０１５年第３１卷第５期

藜芦醇治疗组经药物干预后ＭＶＤ较糖尿病下肢０．０５）。见表１。

缺血组升高，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。见表１、图１。

表１

各组ＭＶＤ及８-ＯＨｄＧ、ｅＮＯＳ表达的比较

ｘ±ｓ

２．２８-ＯＨｄＧ、ｅＮＯＳ的活性测定下肢缺血组大组别ＭＶＤ８-ＯＨｄＧ（Ｕ／ｍＬ）ｅＮＯＳ（Ｕ／ｍＬ）

鼠与假手术组对比，ＭＶＤ及８-ＯＨｄＧ蛋白表达明假手术组４．８１±１．０２１．４７±０．２７４．５２±０．５２显升高，ｅＮＯＳ蛋白表达明显降低（Ｐ＜０．０１）；糖尿下肢缺血组３５．０３±６．０２*７．７３±２．６２*２．６２±０．４８*病下肢缺血组与下肢缺血组比较，ＭＶＤ及ｅＮＯＳ糖尿病组６．１７±１．０７２．０２±０．３４４．７３±０．３５糖尿病下肢缺血组１４．３５±５．４１△

９．８７±１．４７△１．８５±０．５８△蛋白表达降低，８-ＯＨｄＧ表达升高（Ｐ＜０．０１）；而白藜芦醇治疗组

２２．６１±５．２５▲

７．２９±１．８５▲

２．３９±０．３７▲

白藜芦醇治疗组与糖尿病下肢缺血组比较，ＭＶＤ注：与假手术组比较，*Ｐ＜０．０１；与下肢缺血组对比，△Ｐ＜０．０１；及ｅＮＯＳ表达量均增高，８-ＯＨｄＧ表达量下降（Ｐ＜

与糖尿病下肢缺血组比较，▲Ｐ＜０．０５

ＡＢＣＤＥ注：Ａ，假手术组；Ｂ，下肢缺血组；Ｃ，糖尿病组；Ｄ，糖尿病下肢缺血组；Ｅ，白藜芦醇治疗组

图１

各组ＨＥ染色（×２００）

３讨论

脉粥样硬化起到良好的防治作用［７］。

综上所述，白藜芦醇来源广且易于提取，可用糖尿病是威胁人们健康及影响生活质量的重于减轻糖尿病下肢缺血时的氧化应激，促进外周大疾病之一，目前随着生活方式的改变及人口老微血管新生，改善循环。因此，应用白藜芦醇对糖年化，患者数量仍在急剧上升。糖尿病与动脉粥样尿病患者进行早期干预或治疗可延缓外周血管病硬化斑块的形成息息相关，最终造成血管狭窄乃变的发生发展，有望提高患者的生活质量，具有十至器官缺血。

分重要的临床意义［８］。

白藜芦醇又称为芪三酚，属于多酚类化合物，具有抗病毒及免疫调节作用，已证实可以用于预５

参考文献

防和治疗动脉粥样硬化等各种心脑血管疾病。众［１］傅思惟，赵铁梅，李淑梅．白藜芦醇对动脉粥样硬化预防作多研究表明，它不仅具有明显的降糖作用［２］，还可用的研究进展［Ｊ］．中国老年学杂志，２０１４，３：８５４－８５６．［２］

以改善胰岛β细胞的代谢活动，提高胰岛素活性，ＢｈａｔｔＪＫ，ＴｈｏｍａｓＳ，ＮａｎｊａｎＭＪ．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｍｐｒｏｖｅｓｇｌｙｃｅｍｉｃｃｏｎｔｒｏｌｉｎｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ［Ｊ］．Ｎｕｔｒ保护胰岛功能［３－４］。在本实验中发现应用白藜芦醇Ｒｅｓ，２０１２，３２（７）：５３７－５４１．

连续治疗１４ｄ可以增加糖尿病大鼠缺血下肢中新［３］沈利兰，王晓敏，何柏林．白藜芦醇对糖尿病作用的实验研生微血管的数目，从而改善患肢循环。首先，目前究进展［Ｊ］．中国中西医结合杂志，２０１３，３３（２）：２７９－２８１．众多研究［５］已明确表明氧化应激参与了糖尿病［４］

ＴｉｍｍｅｒｓＳ，ＨｅｓｓｅｌｉｎｋＭＫ，ＳｃｈｒａｕｗｅｎＰ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌ的发生发展，而有糖尿病并发症的患者中，氧化应ｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｉｎｏｂｅｓｉｔｙａｎｄｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ：

ｎｅｗａｖｅｎｕｅｓｆｏｒ

ｈｅａｌｔｈｂｅｎｅｆｉｔｓ［Ｊ］．ＡｎｎＮＹＡｃａｄＳｃｉ，２０１３，１２９０（１）：８３－８９．

激的水平则更高。其中，８-ＯＨｄＧ［６］则是ＤＮＡ氧化［５］ＰｉｔｏｃｃｏＤ，ＴｅｓａｕｒｏＭ，ＡｌｅｓｓａｎｄｒｏＲ，ｅｔａｌ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎ损伤的特异及主要的产物，是公认的内源及外源ｄｉａｂｅｔｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｖａｓｃｕｌａｒａｎｄｏｔｈｅｒｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ？［Ｊ］．性因素对ＤＮＡ氧化损伤的生物标志物，是反映糖ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉ，２０１３，１４（１１）：２１５２５－２１５５０．

尿病患者氧化应激状态的良好指标。因此，本实验［６］周厚地，刘东方．８－Ｏ脱氧鸟苷与糖尿病［Ｊ］．国际内分泌代谢杂志，２００７，２７（６）：３９２－３９４．结果可以证明，高血糖及缺血缺氧状态下可使机［７］

ＹｕｅｎＤＡ，

ＳｔｅａｄＢＥ，

ＺｈａｎｇＹ，

ｅｔａｌ．

ｅＮＯＳｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ体氧化应激的水平明显升高，而白藜芦醇治疗能ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓｐｏｄｏｃｙｔｅｓｔｏｉｎｊｕｒｙｉｎｄｉａｂｅｔｅｓ［Ｊ］．

ＪＡｍＳｏｃ

有效降低其升高的程度，有效保护血管及缺血器Ｎｅｐｈｒｏｌ，２０１２，２３（１１）：１８１０－１８２３．

官。其次，白藜芦醇还可以增加ｅＮＯＳ的表达，诱导［８］ＢａｓｈｍａｋｏｖＹＫ，Ａｓｓａａｄ-ＫｈａｌｉｌＳＨ，ＡｂｏｕＳｅｉｆＭ，

ｅｔａｌ．

缺血组织中生成ＮＯ，从而扩张血管缓解缺血缺氧Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｐｒｏｍｏｔｅｓｆｏｏｔｕｌｃｅｒｓｉｚｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｉｎｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＩＳＲＮＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２０１４：８１６３０７［Ｅ－ｐｕｂｌｉｃ］．

状态。除此之外，ｅＮＯＳ还可以抑制血小板聚集与（收稿：２０１４－０９－１８

编辑：王耀东）

黏附，防止血栓形成和抑制炎症因子的表达，对动

白藜芦醇对糖尿病下肢缺血大鼠氧化应激和血管新生的作用

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

韩敦正， 汤穆浛， 邢晓雯， 陆冬晓

510120,广州医科大学附属第一医院心血管内科实用医学杂志

The Journal of Practical Medicine2015(5)

引用本文格式：韩敦正.汤穆浛.邢晓雯.陆冬晓 白藜芦醇对糖尿病下肢缺血大鼠氧化应激和血管新生的作用[期刊论文]-实用医学杂志 2015(5)