植物生理 - 图文

植物生理实验技能训练教程

红色的TTCH。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀（此溶液浓度为每mL含有还原TTC 80μg）。从上述溶液中分别吸取0.25mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL置于10mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度。此时还原TTC含量分别为20、40、80、120、160μg/mL。以乙酸乙酯为空白，用分光光度计在485nm波长下测定吸光度。以吸光度为横坐标，以还原TTC含量为纵坐标，绘制标准曲线。

2．用水培法培养试材或用培养皿在温箱中萌发玉米（或小麦、水稻）种子，待根长约1cm左右时，取约0.5cm长的根尖0.5g，放入小烧杯中，加入0.4%TTC溶液和0.067mol/L磷酸缓冲液各5mL，使根系完全浸入到反应液中，置于37℃的黑暗条件下保温1～2小时，然后立即加入1mol/L的H2SO4 2mL，以终止反应，并准确记时。

3．取出根尖，用滤纸把水分吸干后与3～4mL乙酸乙酯同少量石英砂一起在研钵中研碎，以提取TTCH。把红色的浸提液滤入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，滤入试管，最后加乙酸乙酯使总体积为10mL。

用分光光度计在波长485nm下进行比色，以空白实验（现加入H2SO4，然后再加入根样品，其余操作同上）做对照测出吸光度，查标准曲线即可求出TTC还原量。

4.结果处理

TTC还原强度 = 注释

[1] 0.4mol/L琥珀酸 称取琥珀酸4.72g，溶于少量蒸馏水中，然后定容至100mL。 [2] 植物根水培或砂培的栽培的植物根均可。

TTC还原量??g?

根重?g??时间?hr?五、思考题

1.为什么选用甲烯蓝测定根系表面积？

2.简述各种根系活力测定方法的基本原理，比较各种方法的优缺点？

实训十一 组织中硝态氮含量测定技能训练——比色法

一、实训目的

1. 学会植物组织中硝态氮含量的测定方法。 2. 了解植物组织中硝态氮的含量。 二、实验原理

硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸,a一萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮染

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料，其颜色深浅与氮含量在一定范围内成正比关系，主要化学反应式如下：

三、材料与仪器试剂

分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、试管、移液管、亚硝酸钠 20%醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。

混合粉剂配法：硫酸钡100g、a一萘胺2g、锌粉2g、对氨基苯磺酸4g、硫酸锰10g、柠檬酸75g。

植株 四、训练内容

（一）萃取的原理 绿P71—73 （二）植物组织中硝态氮含量的测定

1.标准曲线绘测：

取恒重亚硝酸钠（NaNO2）0.6071g溶于1升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液，随后稀释成2、4、8、10ug/ml。分别吸取2ml转入50ml有塞试管中，加冰醋酸溶液18ml。并作试剂对照，再加入0.4 g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，将试管中悬浊液过量倾入离心管中，使部分流出管外，白色粉即可去除，离心5分钟（4000rpm）。取上清液在520nm波长下比色测定，绘制标准曲线，本方法适用范围在20ug ml以内。

2.组织液的提取

称取花生功能叶柄0.5克，剪成1—2mm的碎片，充分混匀置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1—3分钟，放置澄清后，取上清液2 ml，再按标准曲线制作方法测定，叶柄中硝态氮含量根据下述公式计算：

植物组织中硝态氮含量（ug/g=c.v）

式中C为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮ug/ml).V为1g植物组织所制备的

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