植物生理 - 图文

植物生理实验技能训练教程

三、材料与仪器试剂

分光光度计；电炉；20ml刻度试管；刻度吸管5ml ，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。 蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。

浓硫酸（比重1.84） 四、训练内容

（一）恒温水浴锅的使用（见前） （二）721分光光度计的使用 2.1 操作方法

①在接通电源之前，应该对于仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固，通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确。

②电表的指针必须位于零刻线上。若指针偏离，则可用电表上的校正螺丝进行调节。 ③将仪器的电源接通，打开比色皿暗厢盖，使电表指针处于零位。预热 20 分钟后，才能使用。

④调节波长旋钮至所需用的单色光波长，选择相应的放大灵敏度档，再用零位电位器校正电表指针指在零位。

⑤将预先装好空白溶液和待测溶液的比色皿依次放入暗厢内的比色皿架上。此时空白溶液应位于光路上。盖上暗箱，使光电管见光，旋转光量调节器，使光电管输出的光电讯号能使电表指针正确处于 100 ％。

⑥按上述方法连续几次调整零位和使电表指针指在 100 ％后，即可进行测定工作。 ⑦在最后一次调节电表指针，使它指在透光率 100 ％后，轻拉比色皿定位装置的拉杆，使待测溶液进入光路。此时由标尺上可直接读出光吸收值和透光率的读数。 2.2注意事项

①可根据不同的单色光波长，和光能量选用放大器灵敏度档。各档的灵敏度范围是：第一档3 1 倍，第二档3 10 倍，第三档3 20 倍。原则是能使空白档良好地用光量调节器调整于 100 ％处。

②仪器底部放有 2 只干燥剂筒，用以保持仪器的干燥，此外在仪器停止工作期间，在比色皿暗箱内，塑料仪器套内都应放防潮硅胶袋。

③仪器的连续使用时间不应超过 2 小时。使用后必须间歇半小时，才能再用。

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④务必保持比色皿透光面的清洁。不要用手摸比色皿的光滑的表面，更不要用毛刷刷洗比色皿，以免影响读数的准确。

⑤脏的比色皿可浸泡在肥皂水中，然后再用自来水和蒸馏水冲洗干净。倒置晾干备用。 ⑥比色皿外边沾有水或待测溶液时，可先用滤纸吸干，再用镜头纸揩净。 ⑦把比色皿放入比色皿架时，要注意尽量使它们的位置前后一致。 ⑧测定时应尽量使被测溶液的光吸收值在 0.1 ～ 0.65 范围内。

⑨仪器的周围应干燥。仪器使完后，应该用塑料套子罩住，并在套子内放数袋防潮硅胶。 ⑩经常注意单色光器的防潮硅胶是否受潮，并及时调换或烘干。

（三）植物组织中可溶性糖的测定

1．标准曲线的制作

按方法一标准曲线的制作方法加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 2．可溶性糖的提取同方法一第二步。 3．显色测定

吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。 4．计算可溶性糖的含量。

V?na3可溶性糖含量(mg/g)=W?10

C?式中 C－标准方程求得糖量(μg)； a－吸取样品液体积(ml)； V－提取液量(ml)； n －稀释倍数； W－组织重量（g）。 五、思考题

1.简述蒽酮法测定可溶性糖的基本原理。

2.干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？怎样避免？

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实训八 种子生活力快速测定技能训练——染色法

一、实训目的

1.了解几种测定种子生活力的方法。 2.掌握TTC法测定种子生活力的原理和方法。 二、实验原理

凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF），胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。 三、材料与仪器试剂

培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。

TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。 四、训练内容 （一）恒温箱的使用

恒温箱用于生物材料的培养，恒温箱的最高工作温度为 60 ℃。 1.1 使用方法

（ 1 ）将温度计插入座内（在箱顶放气调节器中部）。 （ 2 ）把电源插头插入电源插座。

（ 3 ）将电热丝分组开关转到 1 或 2 位置上（视所需温度而定），此时可开启鼓风机促使热空气对流。电热丝分组开关开启后，红色指示灯亮。

（ 4 ）注意观察温度计。当温度计温度将要达到需要温度时，调节自动控温旋钮，使绿色指示灯正好发亮，十分钟后再观察温度计和指示灯，如果温度计上所指温度超过需要，而红色指示灯仍亮，则将自动控温旋钮略向反时针方向旋转，直调到温度恒定在要求的温度上，

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指示灯轮番显示红色和绿色为止。自动恒温器旋钮在箱体正面左上方。它的刻度板不能做为温度标准指示，只能做为调节用的标记。

（ 5 ）在恒温过程中，如不需要三组电热丝同时发热时，可仅开启一组电热丝。开启组数越多，温度上升越快。

（ 6 ）工作一定时间后，可开启顶部中央的放气调节器将潮气排出，也可以开启鼓风机。 （ 7 ）使用完毕后将电热丝分组开关全部关闭，并将自动恒温器的旋钮沿反时针方向旋至零位。

（ 8 ）将电源插头拔下。 2. 注意事项

（ 1 ）使用前检查电源，要有良好地线。

（ 2 ）箱内应保持清洁，放物网不得有锈，否则影响玻璃器皿洁度。 （ 3 ）使用时应定时监看，以免温度升降影响使用效果或发生事故。 （ 4 ）鼓风机的电动机轴承应每半年加油一次。

（ 5 ）切勿拧动箱内感温器，放物品时也要避免碰撞感温器，否则温度不稳定。 （ 6 ）检修时应切断电源 （二）种子生活力的快速测定技术

1.将玉米、小麦等作物的种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。 2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。 3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。

4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min. 5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表8-1内。

表8-1 染色法测定种子生活力记载表

有生活力种方法 注意事项

1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

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无生活力 有生活力种子 种子名称 供试粒数 子粒数 种子粒数 占供式粒数的%