骨保护素对破骨细胞的影响程度分析

图2 OPG对小鼠OC内F-actin环的影响（400×） Fig.Effects of OPG on the mouse OC F-actin ring （400 ×）

a.对照组；b.10 μg/LOPG；c.20 μg/LOPG；d.50 μg/LOPG；e.100 μg/LOPG

2.3 骨吸收陷窝及其面积的计算

牛皮质骨片经培养后取出，扫描电镜观察发现，对照组存在明显的骨吸收陷窝，陷窝长度约为5～80 μm，较深。经Spearman等级相关分析显示，OPG实验组的骨吸收陷窝的面积、密度和减弱程度均与其OPG的浓度呈正相关（r=0.459，P<0.05），且面积比较具有显著性差异（P<0.05，见图3）。.

图3 OPG对小鼠OC骨吸收功能的影响 Fig.3 OPG on mouse OC resorption

3 讨论

骨保护素（OPG）是一种可溶性分泌型糖蛋白，可以作为假受体与RANK竞争性的结合RANKL，从而阻断OC的分化、成熟并诱导其凋来抑制OC的骨吸收功能。研究表明，敲除了OPG基因的小鼠会出现严重的骨质疏松等现象，但是转OPG基因鼠的骨密度却呈现升高的趋势，故OPG类代表药已于2012年被批准使用[4]。近些年发现，OPG不仅仅影响着骨骼的吸收，同时与免疫系统、心血管系统等方面息息相关，如徐高阳等[5-6]研究的OPG与动脉粥样硬化之间的关系，在OPG的研究领域中，这为今后的研究提供了一个全新的研究角度。

OC 是一种终末分化的多核巨细胞且与单核细胞来源相同，其生成受到核因子和巨噬细胞集落刺激因子的调控。就目前的研究状况而言，国内外均无成熟的具有OC特征的细胞株，所以对于OC的获得也仅仅依靠从组织中分离而获得这一主要途径。在本次研究中采用无菌分离前肢肱骨及两后肢长骨而取得骨髓细胞的技术，这样得到的细胞能保持其最高活性，体现最接近人体生理指标的反应。在破骨细胞的的鉴定检测中，形态观察、TRAP染色、组织蛋白酶K的基因水平检测及骨磨片上骨吸收陷窝的形成能力为当前使用最为广泛的方式[7]。针对本次实验内容，本研究选取形态观察、TRAP染色及骨片吸收陷窝形成这3种手段对离体的OC进行鉴定分析。

近些年在OC的鉴别中，通常采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）作为OC的特异性酶对其进行组织鉴别[8]。本次实验也选用这种方法，实验结果显示此鉴别方法简便、可靠。在细胞骨架中，微丝在细胞的形态维持、发生运动和分裂分化中起重要作用[9]。在微丝的组织结构分析中，Actin为其基础蛋白，能够较好的反应微丝的结构形态，且F-actin为细胞骨架的重要部分[10]。在本次实验中，细胞骨架F-actin多为形状规则，边界清晰且数目较多，与张红菊[11]的报道结果一致，说明本次实验所选的染色检测手段适用于对OC的研究。

在OC的体外培养中，数量少、纯度低、不能传代一直是制约其广泛研究的重要问题

[12-15]

。在实验研究中，原代分离的OC具有更好的生物学特性，能更好的保持它的生理活性，

更准确的反映出机体的生理过程中的变化。在本次实验中，尽量保持其细胞的纯洁度，通过TRAP染色、F-actin染色及骨吸收陷窝的鉴定等技术手段，确定本次分离得到了典型的小鼠OC，但我们还需要进行进一步的纯化研究。

综上可知，不同浓度的骨保护素（OPG）对破骨细胞（OC）的活性的影响程度不同，当OPG的浓度为20、50 μg/L时，OPG组的OC数显著减少（P<0.05），而当OPG的浓度为100 μg/L时，OPG组的OC数呈极显著减少（P<0.01）。所以 不同浓度的OPG对破骨细胞的影响程度不同，且OPG的浓度越大其抑制性越强。故本试验通过对不同浓度的骨保护素对破骨细胞的生成和活化程度的影响来研究2者在生理活性及生理功能之间的相关性。 参考文献

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