三七茎叶中叶苷及黄酮的同步分离工艺研究

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为树脂的体积(ml)，V为溶液的体积(ml)。结果见表1。表1 树脂静态吸附结果（略）

试验结果表明AB-8、HPD-100对叶苷及总黄酮静态饱和吸附量均较大，D101树脂对叶苷及总黄酮的吸附能力较小。

2.5.3 树脂动态吸附实验比吸附量是评价树脂真实吸附能力的指标，是选择树脂种类的参数；比洗脱量是评价树脂解吸能力与洗脱剂的洗脱能力的指标，也是选择树脂种类及洗脱剂的参数。本实验以比吸附量和比洗脱量为指标，对上述3种树脂进行筛选。将经预处理的树脂30 ml，湿法装柱，径高比为1∶10，上柱液以1.0 BV/h流速上样，随时采用FeCl3乙醇溶液检测流出液，以FeCl3反应变绿为泄露，停止上样，收集过柱液；纯水冲洗至流出液颜色极淡，然后用95%乙醇洗脱，流速为1.0 BV/h，洗至无明显FeCl3颜色反应。分别收集各支柱子的洗脱液，定容，按“2.2”及“2.3”项下方法测定叶苷及总黄酮含量，计算比吸附量、吸附率、比洗脱量、洗脱率。结果见表2～3。表2 总黄酮动态吸附及洗脱试验结果（略）

比吸附量（mg/ml）=M上-M残-M水洗W

M上为上柱液中指标成分的含量，M残为流出液中指标成分含量；M水洗为水洗脱液中指标成分含量；W为树脂体积(ml)。 吸附率（%）=C0-CrC0×100%

C0为上柱液指标成分浓度(mg/ml)；Cr为过柱液中指标成分浓度(mg/ml)。

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比洗脱量=M洗脱W；M洗脱为洗脱液中指标成分的含量，W为树脂体积（ml）。

洗脱率（%）=比洗脱量比吸附量×100%

表2～3的结果表明，AB-8、HPD-100型大孔树脂对叶苷及总黄酮的动态吸附量、洗脱率均较大，但综合比较可以发现，AB-8树脂的综合收率（叶苷比洗脱量加总黄酮比洗脱量）最好，因此将AB-8型大孔吸附树脂作为进一步分离纯化三七茎叶中叶苷和总黄酮所用树脂。表3 叶苷动态吸附及洗脱试验结果（略） 2.6 纯化工艺参数筛选 2.6.1 上样吸附参数的筛选

上样浓度筛选：取处理好的AB-8大孔吸附树脂，湿法装柱，取5份上柱液，分别调整总黄酮浓度为0.196 3，0.392 6，0.785 2，1.570 4，3.1408mg/ml，叶苷浓度为0.451 5，0.903 0，1.806 0，3.612 0，7.2240 mg/ml。以1BV/h流速上样，然后用纯水洗脱至颜色极淡，计算比吸附量。结果见表4。表4 上柱液浓度对比吸附量的影响（略）

从表4可以看出，AB-8树脂的比吸附量随着上样液质量浓度的增加而增高，当上样液质量浓度升高到总黄酮浓度0.785 2 mg/ml、叶苷浓度为1.806 0 mg/ml时，AB-8树脂的比吸附量趋于饱和。 吸附流速的筛选：精确量取相同体积的上述项中确定的最佳上样液浓度的上样液5份，分别以0.5，1，1.5，2，2.5 BV/h对相同

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型号层析柱、相同体积的AB-8树脂柱进行吸附，然后用蒸馏水洗至颜色极淡，用“2.2”及“2.3”项下的方法测定叶苷及总黄酮的含量,计算出比吸附量。结果见表5。表5 吸附流速对比吸附量的影响（略） 从表5可以看出，随着吸附流速的增加，树脂比吸附量呈显著下降趋势，以0.5 BV/h和1.0 BV/h的流速吸附效果基本相近最佳，考虑到工作量及工作效率等因素，以1.0 BV/h的流速吸附效果最佳。流速过快则树脂泄漏严重，有部分树脂吸附还未达到饱和就已经泄漏，吸附效果明显下降。但若流速过慢，工作量大且工作效率低。 2.6.2 洗脱参数筛选

叶苷与总黄酮的梯度洗脱：将总黄酮浓度为0.785 2 mg/ml、叶苷浓度为1.806 0 mg/ml，上样液以1.0 BV/h流速上样达饱和时，用蒸馏水洗至颜色极淡，分别用10，20，30，40，50，60，70，80，90，100%的乙醇溶液以1.0 BV/h的流速进行洗脱得不同洗脱液，用“2.2”的方法进行测定叶苷含量；用“2.3”的方法进行测定总黄酮含量。结果见图2。从图2可以看出，用60%乙醇溶液可以把吸附在AB-8树脂上的大部分叶苷洗脱下来，再用95%乙醇溶液（乙醇的一般商品规格）可以把吸附于AB-8树脂上的大部分总黄酮洗脱下来。但由图2可以看出：叶苷与总黄酮仍有一定的交叉，分析其原因：大孔树脂吸附原理主要为物理吸附，所以比表面积增加，表面张力随之增大，吸附量提高，对吸附有利。但树脂的实际应用是由树脂的极性、孔径、孔容及均一性的综合性能决定的。因此，出现此结果，可能是大孔吸附树脂的均一性差以及装柱效果不理想等因素所造成的。

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综合以上分析，采用60%的乙醇溶液洗脱，富集以叶苷为主要成分的三七茎叶有效部位(含叶苷87.0%，总黄酮含量为6.4%)；用60%乙醇溶液洗脱后，再以95%的乙醇溶液洗脱，富集以总黄酮为主要成分的三七茎叶有效部位（叶苷含量为13.3%，总黄酮含量为76.5%)。 洗脱流速的筛选：根据上述的筛选结果，以60%和95%的乙醇溶液为洗脱剂，分别采用不同的洗脱流速进行梯度洗脱。结果见表6。表6 洗脱流速对比洗脱量的影响（略）

从表6的实验结果可以看出，当洗脱流速大于1.5 BV/h时，无论是采用60%乙醇溶液，还是95%的乙醇溶液进行洗脱，叶苷和黄酮的洗脱率均大幅度下降，故采用1.5 BV/h的洗脱流速进行洗脱。 2.7 重复性实验采用上样液的总黄酮浓度0.785 2 mg/ml,叶苷浓度为1.806 0 mg/ml的质量浓度上样，以1.0 BV/h的流速吸附，用蒸馏水洗至颜色极淡，以60%的乙醇溶液为洗脱剂，洗脱流速为1.5 BV/h，洗脱直至FeCl3乙醇溶液呈现颜色反应，收集洗脱液，改用95%乙醇溶液继续洗脱，至FeCl3乙醇溶液不呈现颜色反应停止洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏回收溶剂，于60℃真空干燥，测定总黄酮及叶苷的含量，并计算提取物总收率。重复实验6次。结果见表7。表7 重复性实验结果（略）

表7的实验结果表明，采用该工艺提取分离三七茎叶中的叶苷及总黄酮重复性较好，工艺稳定。 3 讨论

利用醇提、AB-8大孔吸附树脂纯化工艺提取分离三七茎叶中叶苷及