环孢素A丙烯酸树脂L100纳米粒的研究 - 图文

苏州大学硕士学位论文 第二章 环孢素A纳米粒稳定性及冻干工艺的初步研究

表2-3 纳米粒溶液的包封率

Tab 2-3 The drug envelopment rate of CyA-L100-NP

Time (month) 0 0.5 1 1.5 2 Drug envelopment rate（%）

NO. 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 4℃ 99.66 99.54 99.57 99.60 99.47 99.52 99.56 99.51 99.52 99.56 99.43 99.51 99.48 99.49 99.63 25℃ 99.66 99.54 99.57 99.67 99.52 99.61 99.63 99.49 99.52 99.59 99.45 99.57 97.78 99.47 99.60 40℃ 99.66 99.54 99.57 99.63 99.57 99.68 99.64 99.51 99.57 99.62 99.48 99.56 98.93 99.46 99.61 二、环孢素A纳米粒冻干工艺的初步研究 1.冷冻干燥简介[21]

冷冻干燥方法（freeze-drying）是指将含有大量水分的物质，预先进行降温冻结成冰点以下的固体，然后在真空条件下使水分子直接升华出来，并用冷凝方法捕获升华的水气，使物质干燥脱水。冷冻干燥可以避免药物受热分解，产品质地疏松，加水后能迅速溶解，稳定性好，有利于贮存。

冷冻干燥一般分三步进行。即预冻、升华干燥（或称第一阶段干燥）、解析干燥（或称第二阶段干燥）。样品溶液首先进行预冷冻，目的是将样品中的自由水固化，便于在真空下进行升华，在冰晶体升华干燥过程中，物质的重要组分被保留并成形，因此干品的形状和冷冻态的湿体形状是基本一致的。同时，由于干燥过程是在低温条件下进行的，药物受破坏的程度及挥发性组分的损失最小。升华干燥阶段是药物制品冷冻干燥的关键阶段。在升华干燥的过程中，随着升华的进行，水分和能量同时减少，保持制品一定的升华速度要供给热量，使其处于―匀速升华‖的干燥状态。但此热量必须加以控制，不能因加热而增加制品的温度，致使形成制品的局部熔融或液化，影响外观质量。在一次干燥过程结束后，还有

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约10 %未被冻结的水未排除，当达到一定含量就为微生物的生长繁殖和某些化学反应提供了条件。二次干燥的目的是进一步去除制品中低温的、一次干燥中尚没能随着冰晶体升华的那部分水分，改善产品的贮存稳定性，延长其保存期。 2.纳米粒冻干工艺研究[22-23] 2.1纳米粒溶液的浓缩

取自制的纳米粒溶液若干，采用超滤法（截留分子量30,000）进一步浓缩至原来体积的30%，得纳米粒胶体浓缩溶液备用。 2.2.冻干保护剂的粗筛选

纳米粒在冷冻干燥过程中容易受到破坏和聚集，冻干保护剂对纳米粒有一定保护作用，而其种类与浓度对纳米粒粒径的稳定性各不相同，因此需要选择合适种类及浓度的冻干保护剂作为纳米粒溶液的支撑剂和保护剂。 2.2.1不同保护剂的冻融实验

以海藻糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇和乳糖为冻干保护剂，各取0.2、0.4 和0.6g，加至8mL上述超滤所得的纳米粒胶体溶液中，加水至10mL，混匀，将其置于25℃，以100r/min速度振荡的恒温震荡箱器，振荡若干时间，加速保护剂的溶解并使纳米粒和保护剂混合均匀。取适量装于10mL安瓿中，置－70℃冰箱预冻12h后，转移至30℃水浴中融化，重复冻融3 次。另取未加冻干保护剂的纳米粒胶体溶液同法操作。与新鲜制备的纳米粒溶液进行比较。以纳米粒的外观和粒径变化为评价指标，考察不同保护剂的保护作用。各指标采用10分制，以得分最高者为好，给分标准以及冻融结果分别见表2-4，2-5。

表2-4 给分标准

Tab 2-4 Standard of score

Score 0-1 2-4 5-8 9-10

）

Aggregation1

）Opalescence2

）

Average particle size

(nm)

＞300 100～300 60～100 ＜60

）

PDI value ＞0.4 0.3～0.4 0.1～0.3 ＜0.1

3 2 1 0 - + ++ +++

注：10、1、2、3分别表示目测无聚集、少量聚集、显著聚集及沉淀不溶；2+++、++、+、- 分别表示乳光强烈、乳光较弱、乳光微弱、几无乳光，下表同。

））

Note: 10,1,2,3 means no aggregation, small aggregation, large aggregation and sediment; 2+++,++,+,- means significant opalescence, poor opalescence, tenuity opalescence and no opalescence, similar to the following tables.

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表2-5 不同冻干保护剂冻融结果（n=3）

Tab 2-5 The result of freeze-thawing of different cryoprotectants（n=3） Sample Initial CyA-L100-NP

Aggregation Opalescence

— — 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

+++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++

Average particle size (nm) 42.9 ±4.2 47.04 ±4.3 46.4 47.2 63.2 70.7 64.4 54.5 52.2 54.6 49.3 40.9 42.8 46.1 48.1 47.3 55.8 42.5 51.6 44.4

PDI value 0.075 ±0.010 0.242 ±0.068 0.079 0.098 0.240 0.187 0.155 0.088 0.173 0.229 0.202 0.083 0.095 0.132 0.195 0.037 0.201 0.073 0.193 0.120

Sore — — 40 40 33 34 35 39 36 35 36 40 40 38 37 40 35 40 36 38

Without cryoprotectants

sucrose lactose mannitol sorbitol glucose trehalose

2% 4% 6% 2% 4% 6% 2% 4% 6% 2% 4% 6% 2% 4% 6% 2% 4% 6%

由上表可以直观看出，上述保护剂对纳米粒均能起到保护作用而相互之间没有显著性差异。

2.2.2不同保护剂的冻干实验

取上述已添加保护剂的纳米粒2ml于称量瓶中（n=3），置－70℃冷冻12h后，置真空冷冻干燥机内冷冻干燥24h，得纳米粒冻干品。将冻干品添加水复溶，以纳米粒的外观和粒径变化为评价指标,根据上述给分标准打分，结果见表2-6。

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表2-6不同冻干保护剂冻干结果（n=3）

Tab 2-6 The result of freeze-drying of different cryoprotectants（n=3） Sample

Initial CyA-L100-NP Without cryoprotectants

2% sucrose 4%

6%

2% lactose 4%

6%

2% mannitol 4%

6%

2% sorbitol 4%

6%

2% glucose 4%

6%

trehalose

2% 4% 6%

Aggregation Opalescence

— 3 1 1 2 1 1 2 3 3 3 2 3 3 2 2 3 2 2 2

+++ - +++ ++ + +++ +++ ++ - + - + + - ++ + - + + +

Average particle size (nm)

PDI value

Sore — — 33 29 24 31 29 29 0 1 0 18 7 4 21 19 6 8 16 15

42.9±4.2 0.0746±0.010 2609.5±613.1 1.000±0.000 54.0±0.3 0.141±0.033 67.6±2.5 0.155±0.037 113.3±7.5 0.243±0.023 75.2±20.7 0.181±0.103 81.9±4.5 0.205±0.010 64.6±0.45 0.157±0.017 1633.5±272.2 1.000±0.000 2956.5±335.9 1.000±0.000 3204±685.9 0.804±0.278 136.4±13.7 0.248±0.006 191.4±76.3 0.309±0.111 167.3±94.9 0.408±0.010 81.7±7.1 0.183±0.054 82.3±28.7 0.257±0.145 193.4±38.7 379.8±235.3 126.2±12.2 157.5±18.6

0.357±0.130 0.507±0.148 0.306±0.051 0.311±0.081

2.3乳糖和蔗糖冻干保护剂浓度的筛选

通过上述结果可知，以蔗糖和乳糖为冻干保护剂对纳米粒的保护作用比较理想，得分较高，复溶后的纳米粒乳光强，粒径变化相对较小。对其进行进一步筛选，分别取蔗糖0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5g，取乳糖0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0g，按照2.2.2项方法操作，结果见下表2-7。

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