王丹论文

高糖高脂联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病

材料与方法

1 实验材料 1.1 实验动物

雄性SPF级SD大鼠，8周龄，体重：180-220g,购自广东省医学实验动物中心 1.2 药品与试剂

链脲佐菌素 Sigma公司高糖

多聚甲醛 上海博谷生物科技有限公司

1.3 实验仪器 高脂饲料原料 广东省医学实验动物中心

血糖仪及血糖试纸 德国罗氏诊断公司

大鼠胰岛素酶联检测试剂盒 南京建成有限公司

立式压力蒸汽灭菌器 SANYO

双人双面洁净工作台 苏州净化 JC101型电热鼓风干燥箱 上海成顺仪器仪表有限公司 Elx-800型全自动酶标仪 莱卡公司

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低速离心机 安徽中科中佳科技有限公司 2 实验方法 2.1 大鼠饲养

雄性SPF级SD大鼠30只，8周龄，体重：180-220g,实验动物房常规饲养，室温控制在25-27℃，40％-60％湿度，适应性喂养5天并观察，记录大鼠毛色、精神状态、体重、大小便等无异常后，随机分组：空白对照组(n=8只)和Ⅱ型糖尿病模型组(n=20只)。空白对照组始终喂SPF级普通大鼠饲料，Ⅱ型糖尿病大鼠模形组喂养高糖高脂饲料一个月。 2.2 链脲佐菌素的注射

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高糖高脂联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病

一个月后两组中所有的大鼠12小时禁食不禁水，配置链脲佐菌素注射液：在无菌环境下将柠檬酸柠檬酸钠缓冲液进行过滤除菌，将0.5g链脲佐菌素溶于25ml的柠檬酸柠檬酸钠缓冲液中混匀即为20mg/ml的STZ溶液（现配先用，避光）。Ⅱ型糖尿病模形组大鼠进行腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ，37mg／kg)，空白对照组大鼠腹腔注射等体积柠檬酸柠檬酸钠缓冲液。 2.3 检测血糖

注射STZ 72 小时后检测空腹血糖，监测3周血糖值变化，选择FBG≥16.7 mmol／L为Ⅱ型糖尿病模型的合格标准。 2.4 口服糖耐量实验

在注射STZ 4周后经空腹血糖变化稳定后进行口服糖耐量试验，两组中所有大鼠禁食12小时后，单次灌胃葡萄糖2.3g/kg,分别在0、0.5、1、2 小时后血糖试纸取尾静脉的血检测血糖。 2.5检测大鼠血清胰岛素检测

大鼠血清胰岛素检测是STZ注射前及3周的空腹血糖变化稳定后进行尾静

脉采血后按试剂盒说明书进行检测，胰岛素抵抗的标准是：胰岛素敏感指数与对照组相比差异有显著性

2.6 大鼠胰腺组织形态学检测

构建Ⅱ型糖尿病模型实验结束后，采用眼球取血将部分大鼠处死，立即解剖大鼠，取大鼠胰腺组织在生理盐水中清洗干净后，以4％多聚甲醛溶液固定24小时。进行组织酒精梯度脱水：85％乙醇浸泡1h；90％乙醇浸泡2h；95％乙醇浸泡2h；无水乙醇浸泡2h。组织在树脂浸泡液中2h,梯度浸腊3h分为3次，石蜡常规包埋、切片，干燥后进行苏木素-伊红(HE)染色。HE染色步骤为：二甲苯（10分钟）、二甲苯（10分钟）、无水乙醇（2分钟）、无水乙醇（2分钟）、95％乙醇(2分钟)、90％乙醇(2分钟)、80％乙醇(2分钟)、70％乙醇(2分钟)、水洗（1分钟）、苏木素染色（5分钟）、水洗（1.5分钟）、盐酸酒精（1-2秒）、水洗（8分钟）、伊红染色（23秒）、水洗（1分钟）、70％乙醇(1-2

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高糖高脂联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病

秒)、80％乙醇(1-2秒）90％乙醇(1-2秒）、95％乙醇(1-2秒）、无水乙醇（1-2秒）、烤片、用中性树胶封片，用显微镜观察组织形态学变化。 3数据处理

所有数据采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，P＜0.05时有统计学意义。

结 果

讨 论

结

论

参 考 文 献

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致 谢

本文的选题、课题研究及撰写工作是在邵敏导师的关怀和悉心指导下完成的。毕业论文期间，老师严谨的学风、渊博的知识和敏锐的思维使我受益终身。在此谨向邵敏老师致以崇高的敬意和衷心的感谢!

在课题的进行中，我还得到了研究生王新颖师姐的耐心指导和帮助。在此也向师姐表示最诚挚的谢意。

还要感谢在实验和生活中给予我帮助的同学及朋友。

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