基因工程考试 质粒的分子生物学与质粒载体

第二章 DNA重组克隆的单元操作

练习题

质粒的分子生物学与质粒载体（练习题）

一、填空题

1. 基因工程中有 3 种主要类型的载体： 、 、 。 2. 由于不同构型的 DNA 插入EB 的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA 的泳动速度 ，OC DNA 泳动速度 ，L DNA 居中，通过凝胶电泳和EB 染色的方法可将不同构型的DNA 分别开来。

3. 质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点开始的。然而，质粒的复制可以是向的、或是 向的。在杂种质粒中，每个复制子斑点都可以有效地加以使用。但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下 的复制起点可能被关闭。

4. 就 克 隆 一 个基因(DNA 片段) 来说， 最简单的质粒载体也必需包括三个部

分： 、 、 。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。

5. 如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则属于 群，这是因为它们的 所致。

6. 质粒拷贝数是指细胞中 。

7. 复制子由三部分组成：(1) (2) (3) 。 8. 酵母的 2μm 质粒有 ，可以配对形成哑铃结构。

9. 一个带有质粒的细菌在有 EB 的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫 。

10. pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 ，它的四环素抗性基因来自于 ，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。

11. 粒的消失同染色体基因的突变是不同的，前者不能恢复，后者可以通过恢复 该基因的性状。

12. ColEl 质粒复制的起始需要三种酶，即 、 和 。

13. YAC 的最大容载能力是 ，BAC 载体的最大容载能力是 。 14. pSCl01 是一种 复制的质粒。

15. 把那些没有可检测表型的质粒称为 。

16. 转座子主要由下列部分组成：(1) (2) (3) 。

17. pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC 系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ，Amp 抗性基因则是来自 。

二、判断题

1．迄今发现的质粒DNA 都是环状的。

2．线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。

3．有a、b、c 三个质粒，因为a 和b 能够共存于一个细胞，a 和c 也可共存于同一个细胞， 所以b 和c 一定能够共存于同一个细胞。

4. 插入元件(1S)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。

5. 如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和 群。

6. 一个带有反向重复序列的双链 DNA 经变性后，复性时其单链可形成发夹环。

7. 能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。

8．任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。

9．只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。 10．CsCl-EB 密度梯度离心法纯化SC DNA 原理是根据EB 可以较多地插入到SC DNA 中， 因而沉降速度较快。

11．质粒ColEl 同pSCl01 共整合后，得到重组质粒pSCl34，具有两个复制起点，这两个起 点在任何细胞中都是可以使用的。

12．pBR322 可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连 接，都可以用同一种酶回收外源片段。

13．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不 同。

14．一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。

15．ColEl 是唯一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。 16．某一染色体DNA 经内切酶Sal I 切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA 片段，将 这些片段分别在T4 DNA 连接酶的作用下自身连接成环，然后导入受体细胞，都可以进 行独立地复制。

17．如果细菌的某种表型特征在UV 处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。 18．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。

三、选择题(单选或多选)

1．线性质粒复制的引物来自于【 】 A细胞中合成的小分子RNA B自身末端的端粒序列 C外加的寡聚DNA

D自身断裂的小分子DNA

2．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，【 】是不正确的 A质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约， 因而有较多的拷贝数

B可以在氯霉素作用下进行扩增 C通常带有抗药性标记

D同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子

3．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载 体中只有【 】被视为用作基因工程载体的天然质粒载体 ApBR322 BpSCl01 CpUBll0 DpUCl8

4．下列哪种克隆载体对外源DNA 的容载量最大?【 】

A 质粒；B 黏粒；C 酵母人工染色体(YAC)；D λ噬菌体；E cDNA 表达载体 5．反向重复序列：【 】

A 可以回折形成发夹结构； B 可以是某些蛋白的结合位点 C 参与转座子的转座； D 以上说法都不对 6．松弛型质粒：【 】

A 在寄主细胞中拷贝数较多； B 可用氯霉素扩增 C 一般没有选择标记； D 上述A、B两项正确

7．ColEl 是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： 【 】 A 是松弛复制型； B 具有四环素抗性

C 能被氯霉素扩增 ；D 能产生肠杆菌素

8．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：【 】 A OC DNA>SC DNA>L DNA； B SC DNA>L DNA>OC DNA C L DNA>OC DNA>SC DNA ； D SC DNA>OC DNA>L DNA

9．pBR322 是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自：【 】 A ColEl ；B；Ri 质粒； C pSCl01； D pUCl8

10．关于质粒的相容性，下面哪一种说法不正确? 【 】 A 不同相容群的质粒能够共存于同一个细胞

B 质粒可以分成若干个不相容群，但不能分成若干个相容群 C 如果a、b 两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同

D 属于同一个不相容群中的质粒，不仅复制机制相同，而且拷贝数和分子量也相同 11．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?【 】 A 在不同的宿主中具有不同的复制机制 B 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点 C 在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 D 在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率

12．能够用来克隆32kb 以下大小的外源片段的质粒载体是【 】 A charomid； B plasmid； C cosmid ；D phagemid 13．第一个作为重组DNA 载体的质粒是( )

A pBR322 ；B ColEl； C pSCl01； D pUCl8 14．T1 质粒：【 】

A 可从农杆菌转到植物细胞中 B 作为双链DNA 被转移 C 在植物中导致肿瘤

D 介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 E 需要细菌的vir 基因帮助转移 F 在植物细胞中作为染色体外质粒 15.载体的功能是 【 】

I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力 Ａ I ；Ｂ I + II ；Ｃ I + III；Ｄ II + III ；Ｅ I + II + III 16. 下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是 【 】

Ａ 质粒是共价环状的双链 DNA 分子；Ｂ 天然 质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列 Ｃ 质粒在宿主细胞内能独立于染色体 DNA 自主复制；Ｄ 松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增 Ｅ 质粒并非其宿主细胞生长所必需

17. 多聚接头（ Polylinker ）指的是 【 】

Ａ 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段

Ｂ 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段；Ｃ 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段 Ｄ 含有多种启动基因的人工 DNA 片段；Ｅ 含有多种特定密码子的人工 DNA 片段 18.λ -DNA 体外包装的上下限是天然 λ-DNA 长度的 【 】

Ａ 25 - 50 % Ｂ 50 - 100 %Ｃ 75 - 100 % Ｄ 75 - 105 % Ｅ 100 - 125 % 19.考斯质粒（cosmid）是一种 【 】

Ａ 天然质粒载体；Ｂ 由 λ-DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体 Ｃ 能裂解受体细胞的烈性载体Ｄ 具有溶原性质的载体 Ｅ 能在受体细胞内复制并包装的载体

20. 下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是 【 】

Ａ Cosmid > λ-DNA > Plasmid ；Ｂ λ-DNA > Cosmid > Plasmid Ｃ Plasmid > λ-DNA > Cosmid ；Ｄ Cosmid > Plasmid > λ-DNA Ｅ λ-DNA > Plasmid > Cosmid

21.目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是 【 】

Ａ 质粒 DNA ；Ｂ 噬菌体 DNA ；Ｃ 病毒 DNA ；Ｄ 线粒体 DNA；Ｅ 叶绿体 DNA

四、简答题

1．YAC 载体具有什么样的功能性DNA'序列?为什么在克隆大片段时，YAC 具有优性？ 2．列举质粒载体必须具备的4 个基本特性。 3．什么叫穿梭载体?

4．说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。

5．虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质 粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。请举一例说明之。 6．为什么来自Hfr×F－的重组体几乎总是F－?

7．解释为什么不同的Hfr 菌株具有不同的转移起点和方向? 8．怎样从一个E．coli 的Hfr 菌株中分离到一个F'gal＋的菌株?

9．你已经分离了一个新的F’因子， 怎样用最简便的方法知道最初的F 因子的部分DNA 已经被切除，并被一个外源DNA(也就是细菌DNA)所替代? 10．你能用哪一种基因转移的方法确定

(1)E．coli 染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置； (2)一个新分离的突变在基因内的位置。

11．用加有注释的图表说明F 质粒是怎样从一个F+细胞转移到F-细胞。并简要说明转 移复制如何不同于营养体的复制。

五、问答题

1. 什么是复制子(replicon)?

2. 什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么? 3. 什么是质粒的带动转移?

4. 说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。 5. ColEl 衍生质粒拷贝数调节的机理是什么? 6. R1 质粒拷贝数受到怎样的调节控制? 7. 质粒如何维持在细胞中的稳定?

8. 引起质粒不相容性的主要原因是什么?

9. 由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行严格 的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面? 10．请指出质粒pSCl01 的一些生物学特性(包括结构和遗传)及在基因工程中的作用。

11．自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是ColEl 和pSCl01 这两个自然质粒 也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容? 12．质粒改造的发展过程如何?