荧光法习题

5. 说明荧光发射光谱和荧光激发光谱两者的差别，哪一种类似于吸收光谱。 6. 试述能发射荧光的物质在分子结构上有哪些特点？ 7. 画出荧光计结构示意图，并写出定量分析公式。

8. 一般无机化合物不发荧光，可以通过哪两种途径用荧光分析法测定无机物？ 9. 作荧光强度测量时，标准荧光物质的作用是什么？如何进行测量的？ 10. 试述荧光强度与溶液浓度成正比的条件,为什么? 11. 试述何谓荧光物质的激发光谱和荧光光谱? 12. 试述荧光是如何产生的?

13. 绘制荧光测定装置方框图,并说明某主要部件和作用。

14. 在荧光计中，第一单色器与第二单色器的位置及其作用是怎样的。 15. 荧光定量分析为什么要在很稀的溶液中测定？

16. 与紫外可见分光光度法相比，荧光分光光度法具有较高的灵敏度，为什么？ 17. 影响荧光测定的因素有哪些？

18. 绘出光度分析和荧光分析仪器的结构方框图，并比较它们的异同点。

六、计算题

1. 用荧光法测定复方炔诺酮片中炔雌醇的含量时，取本品10片（每片含炔雌醇31.5～38.5?g），研细溶于无水乙醇中，稀释至100ml，过滤，取滤液5.0ml稀释至10.0ml，在307nm处测定荧光读数。如炔雌醇对照片的乙醇溶液（1.75?g/ml）在同样测定条件下荧光读数为65，则合格片的荧光读数应在什么范围之间？

2. 利用连二亚硫酸钠Na2S2O4可熄灭核黄素（维生素B2）发出的荧光来测定奶粉中的VB2含量，精确

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称取0.500g奶粉，加pH4.6 HAc-Ac缓冲液沉淀蛋白质，移入50ml容量瓶中，加水至刻线，振摇，过滤，取滤液测得荧光强度Fx为28.5，取出比色皿加入少量Na2S2O4，迅速摇匀使VB2荧光熄灭，立即再测荧光强度F?0为6.2。另取浓度为0.25μg/ml VB2标准液，测得Fs=50，取出比色皿同法加入Na2S2O4后测得F0为5.4。试计算.05g奶粉中含VB2的?g数。

3. 滂铬蓝黑R染料，在HAc-NH4Ac缓冲液中能与Al3+反应，生成橙红色荧光化合物，标准溶液测定结果如下：F0=3.2

Al3+（?g/ml） 2 6 10 14 18 F 13.2 33.4 53.8 73.0 93.4

用同法测定水样，得荧光强度为45.0，求该水样中Al3+的含量（mg/L）。

4. 用荧光法测定食品中维生素B1：称取2.00g食品，用HCl浸取出维生素B1后，稀释成100ml，精确吸取该溶液15.00ml，用吸附剂除去干扰物后稀释成250ml。分别取此液各5.00ml，置于A和B容器中，向A中加入碱性铁氰化钾溶液氧化维生素B1为硫胺荧。B留作对照。另取维第素B1标准淮

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（0.200?g·ml1）5.00ml两份，分别置于C和D容器中，向C中加入碱性铁氰化钾使无氧化，D作对

?1g照。用异丁醇分别萃取四种溶液，都定容为10ml，数据见下表。求该食品中维B1含量（?g·）。

溶 液 荧光强度

A（经氧化处理样品液） 52.0 B（未经氧化处理样品液） 8.0 C（经氧化处理标准液） 62.0 D（未经氧化处理标准液） 7.0

5. 取5.00ml含氨基乙酸的溶液置于一个500ml容量瓶中，并以蒸馏水稀释至刻度，用移液管取5.00ml稀释于一个10ml容量瓶中，并以pH8.7的硼酸盐缓冲液稀释至刻度，当它与1.00ml由25mg荧胺溶于100ml丙酮所配成的溶液反应后，测量这溶液的荧光。（荧胺与氨基乙酸反应可生成一荧光产物）。从工作曲线上读得最后溶液中含1.14mg/L的氨基乙酸，计算在最初的5ml溶液中氨基乙酸的浓度。

6. 10ml样品含还原型NADH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的还原型）相对于空白溶液的荧光强度为26.0。当10?mol NADH加入此样品液（无体积变化）中，相对荧光强度增加到78.3，计算样品中NADH的含量（?mol/ml）。

7. 用荧光分析法测定某食品中的维生素B1的含量，1.0g试样处理后定容为100ml，标准液为0.20?g/ml。测得平行样品数据如下表：求该食品中VB1含量（?g/g）

试 液 经氧化处理后的标准液 未经氧化处理的标准液 经氧化处理的试样液 未经氧化处理的试样液 荧光强度 72.0 8.0 55.0 7.0 8. 用荧光分析法测定食品中维生素B2的含量：称取2.0g食品，先照后用10ml氯仿萃取（萃取率100%），取上清液2.0ml，再用氯仿稀释为10ml。维生素B2氯仿标准液浓度为0.10?g/ml。测得平行样数据为F0=1.5，Fs=69.5，Fx=61.5，求该食品中维生素B2含量（?g/g）

9. 设721分光光度计的可信测定A值为0.20～0.65。今用1cm吸收池，于525nm波长下测定KMnO4溶液（KMnO4分子量为158，?525nm=2.5?103）。试预算出在该条件下KMnO4溶液的可信测定浓度范围。 10. 用荧光分析的比较法测定VitB1含量, 其标准液浓度为8.0mg/L时, 测得荧光强度为0.24, 取样品2g, 溶于100ml盐酸中, 测定其荧光强度为0.20, 空白液荧光强度为0.004, 求样品中VitB1的含量?