微生物复习提纲

《应用微生物技术》复习提纲

1、微生物学的发展史，重要人物所做的突出贡献

史前时期：中国古代农民用谷物酿酒（8000年前至1676） 初阶阶段：荷兰人列文虎克，准确地描述了微生物的形态。 奠基时期：

巴斯德：微生物学的奠基人。他把微生物学的研究从形态描述推进到生理学研究水平，并开创了寻找病原微生物的兴盛时期，使微生物学开始以独立的学科形成。贡献：(1)曲颈瓶实验彻底否定了“自然发生”学说；（2）证实了发酵是由微生物引起的。（3）将病原菌减毒，使其转变为疫苗。（狂犬疫苗）

科赫：（1）发明了固体培养基制备方法，并建立通过了固体培养分离纯化微生物的技术；（2）用自创的方法分离了许多病原菌，如炭疽芽孢杆菌、结核分枝杆菌等；（3）提出了“科赫法则”；（4）创立了许多显微镜技术，如细菌鞭毛染色法、悬滴培养法等。

发展阶段：

布赫纳：用酵母菌无细胞压榨汁将葡萄糖进行酒精发酵获得成功，发现了微生物酶的重要作用，从此将微生物学推进到了生化研究的阶段。此后，微生物生理、生化等研究得到了迅速的发展

弗莱明：发现点青霉能抑制葡萄球菌的生长，揭示了微生物间的拮抗关系，并发现了青霉素。

2、细菌的形态、细胞结构功能和繁殖方式、生长曲线 细菌的形态与结构功能：

细菌是具有细胞壁的一类单细胞原核微生物，形体微小，结构简单。无成形细胞核，无核膜和核仁，除蛋白体外无其他细胞器，在适宜的条件下有相对稳定的形态与结构，分布广，种类多，与人关系密切。 细菌的形态：,通常以微米(Micrometer,um;1um=1/1000mm)作为测量它们大小的单位

按其外形主要有三类

1.球菌：呈圆球形或近似圆球形，有的呈矛头状或肾状。单个球菌的直径约在0.8~1.2um左右。又称化脓性球菌（ 1双球菌，2链球菌 3.四联球菌和八叠球菌4.葡萄球菌）肺炎双球菌，溶血性链球菌， 藤黄八叠菌，金黄色葡萄球菌

2杆菌：：各种杆菌的大小，长短，弯度，粗细差异较大。大多数杆菌中等大小，长（2-5微米，宽0.3-1微米）。多数呈直杆状，大的杆菌如炭疽杆菌(3~5um×1.0~1.3um),小的如野兔热杆菌 (0.3~0.7um×0.2um)。介于球菌和杆菌之间的，称为球杆菌。两端多呈钝圆形，少数两端平齐（炭疽杆菌），两端尖细（梭杆菌） 末端膨大呈棒状（白喉杆菌）排列一般分散存在，无一定排列形式， 偶有成对或链状，（枯草芽孢杆菌），呈链状，个别呈特殊的排列呈八字状或栅栏状，（白喉杆菌）。

1.弧菌(Vibrio)菌体只有一个弯 曲呈弧状或逗点状。如霍乱弧菌偏端生鞭毛

3螺旋菌：菌体弯曲，可分为：

2.螺菌(Spirillum)菌体有数个弯 曲。如鼠咬热螺菌。

细菌形态可受各种理化因素的影响，一般说来，在生长条件适宜时培养8~18小时的细菌形态较为细菌形态较为典型型;幼龄细菌形体较长;细菌衰老时或在陈旧培养物中，或环境中有不适合于细菌生长的物质(如药物、抗生素、抗体、过高的盐分等)时，细菌常常出现不规则的形态，表现为多形性(Pleomorphism),或呈梨形、气球状、丝状等，称为衰退型(Involutionform),不易识别。观察细菌形态和大小特征时，应注意来自机体或环境中各种因素所导致的细菌形态变化

细菌的结构：细菌的结构对细菌的生存，致病性和免疫性等均有一定作用。分为基本结构和特殊结构，各种细菌共有的结构称为基本结构，包括细胞壁，细胞膜，细胞质和核质，将某些细菌在一定条件下所持有的结构称为特殊结构，包括鞭毛，芽孢，菌毛和荚膜。

基本结构：1细胞壁，细胞壁为细菌表面比较复杂的结构，是一层厚度平均为15-30纳米，质量均匀的网状结构，可承受细胞内强大的渗透压而不被破坏。细胞壁紧贴细胞膜外，坚韧而有弹性。（主要成分是肽聚糖又称黏肽，由肽聚糖单体聚合而成的网状大分子，单体由（N-乙酰葡萄糖胺（G）和N-乙酰胞壁酸（M）两种氨基糖经β-1，4糖苷键连接形成的多糖骨架，在N-乙酰胞壁酸分子上连接四肽侧链，肽链之间再由肽桥或者肽链联系起来，组成一个机械性很强的网状结构。各种细菌细胞壁的肽聚糖的支架均相同，四肽侧链的组成及其连接方式随菌种而异）

细胞壁的功能：细菌细胞壁坚韧而富有弹性，保护细菌能承受胞内巨大渗透压，而不被破坏，与细胞膜共同参与细胞内外物质的交换，细胞壁可允许水分及直径小于1纳米的可溶性小分子自由通过，

革兰氏阳性菌：肽聚糖（基本结构），包括聚糖骨架，四肽侧链，五肽交联桥 磷壁酸（特殊成份），包括膜磷壁酸，壁磷壁酸 表面蛋白（特殊成分），包括SPA,M蛋白 三维立体结构，磷壁酸，抗原性强，是革兰氏阳性的重要表面抗原，调节离子通过黏肽层中起到作用， 革兰氏阴性菌:肽聚糖（基本结构），包括聚糖骨架，四肽侧链 外膜（特殊成分），二维平面结构。 外膜层位于细胞壁外侧，由脂蛋白，脂质双层，脂多糖三部分组成。

细胞膜：又称细胞质膜，位于细胞壁内侧，紧包在细胞质外的具有弹性的半渗透性生物膜，主要由磷脂和蛋白质组成。在电子显微镜下观察，显双层结构。磷脂分子由一个带正电荷且能溶于水的极性头（磷酸端）和一个不带电荷，不溶于水的非极性尾（烃端）构成。极性头朝向膜的内外两个表面，呈亲水性，非极性端则埋藏在膜的内层，形成磷脂双分子层，其中含有各种功能的蛋白质。

功能：具有选择性通透作用，与细胞壁共同完成菌体内外物质的交换；膜上有多种呼吸酶，参与细胞的呼吸过程，膜上有多种合成酶，参与生物合成过程

细胞质：又称原生质，为无色透明黏稠的胶状物，基本成分是水，糖，蛋白质，脂类，核酸，少量无机盐，是细胞的内环境，内含丰富的酶系统，是细胞合成和分解代谢的主要场所。细胞质中还有多种重要的结构

质粒：是染色体外的遗传物质，游离于细胞质中，闭环双链DNA分子，分子量小于染色体（脱氧氢核酸），携带某些特殊的遗传信息，编码。如细菌的耐药性，产抗生素，性菌毛等一些次要性状，能进行独立复制，非细菌生存所必需，失去质粒的细菌能正常存活。 核糖体：又称核蛋白体

细菌的繁殖方式：

生长曲线：

曲线形成的条件是少数细菌接种到固定容积的液体培养基中培养

接种一段时间后，菌数迅速增长（如图BC段），此时种群数量变化与__J__型曲线相似，原因是营养充足，培养条件适宜。

（3）若此细菌最初的数目是n，每20min繁殖一代，调整期后2h，发酵罐中的菌数为____64n___；

（4）A～D段与种群数量变化的__S__型曲线相似，请解释曲线C点～E点的成因：

随着营养物质的消耗，有害代谢产物的积累，pH的变化等，细菌的分裂速度下降，死亡细胞的数目增加，整个培养基中新增加的细胞数目和死亡的细胞数目达到动态平衡

（5）C～D段表示此细菌群体的生长进入__稳定__期，该期是积累___次级代谢_____产物的关键时期。

（6）种内斗争最激烈的阶段是____C～D_。

3放线菌的形态、繁殖方式 4酵母菌的形态和繁殖方式 5病毒的结构和繁殖方式 6显微镜的使用及维护方法

7革兰氏染色的基本原理方法和注意事项

原理G﹢菌:细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。

Gˉ菌:肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红

注意事项：

1.要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。

2.革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。

3.染色过程中勿使染色液干涸，用水冲洗后，应吸去玻片上的水渍，以免染色液被稀释影响染色效果。

8药典中有关微生物限度检验的相关内容，如细菌总数、霉菌酵母菌数、大肠菌群数等指标检验时所用培养基种类和培养时间温度,结果报告方式 附录微 生 物 限 度 检 查 法

微生物限度检査法系检査非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检査项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

微生物限度检查应在环境洁净度1 0 0 0 0级下的局部洁净度1 0 0级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应