大学有机化学实验二番茄红素和β-胡萝卜素的提取及薄层层析法分离法预习报告

实验二 番茄红素和β-胡萝卜素的提取及薄层层析法分离

一、

实验目的

理解薄层层析的分析原理

学习从番茄中提取番茄红素和β-胡萝卜素的方法 掌握薄层层析法基本操作

学会用薄层层析法鉴定番茄中的番茄红素和β-胡萝卜素

（1） （2） （3） （4）

二、 实验原理

番茄红素主要来源于番茄（西红柿）、南瓜、西瓜、柿子、桃、芒果、葡萄、草莓、柑橘等果实，茶的叶子及胡萝卜、甘蓝等根部也含有番茄红素。由于番茄红素具有抗氧化、抑制突变、降低核酸损伤、减少心血管疾病及预防癌症等多种功能，因此，番茄红素日益受到营养界的关注。

番茄红素

β-胡萝卜素存在于黄、红色蔬菜中，以胡萝卜中含量尤富。番茄中也含有一些β-胡萝卜素。它是维生素A的前体，人体中缺乏维生素A可引起夜盲症，而且会影响正常的生长发育。

β-胡萝卜素

番茄红素和β-胡萝卜素都是类胡萝卜素。本实验先用乙醇将番茄脱水，然后用环乙烷提取，最后利用二者的极性差异用薄层层析法（TLC法）鉴定。

三、实验步骤

（一）、番茄中番茄红素和β-胡萝卜素的提取 1、除水分

称取番茄4g于研体中→捣烂→在漏斗中沥去水分→用纸巾包裹残渣→在研体中滤去水分→加3ml95%乙醇→搅拌→压出乙醇液并弃去→重复一次除水操作→得到残渣

2、提取番茄红素和β-胡萝卜素

置残渣于研体中→加2ml环己烷→搅拌→提取液移至干燥的小试剂管中→加少

量的无水硫酸钠→充分振摇→试管口塞上棉花，置于暗处备用

（二）薄层层析 1、点样

TLC板→画起点线、终点线和标记样品点→点样

2、展开

层析缸（底部垫滤纸）→加适量环己烷后展开→取出TLC板→立即用铅笔标记溶剂前沿和圈出斑点

3、计算计算比移值Rf

四、思考题

（一）拖尾现象产生之原因及解决方法： 1、点样量太多，展开剂不能全部负载。

解决方法：寻出合适之点样量后，再进行层析。

2、展开剂pH值偏高。如以中性展开剂层析酸性物质时，常形成斑点拖尾。 解决方法：在展开剂中加入酸，使解离受到抑制，即可防止斑点拖尾。

3、展开剂的pH值偏低。如以中性展开剂层析生物碱和其它弱碱时，常观察到斑点拖尾。

解决方法：在层析K值在10-3～10-8的碱性化合物时，展开剂应调至碱性(如加入吡啶、二乙胺等)。

4、吸附剂pH的影响。 由于化合物与薄层上的酸、碱成盐而产生拖尾现象。 解决方法：换用pH合适的吸附剂或调整展开剂的pH，如加入酸或碱等。

5、吸附剂和展开剂中痕迹量的金属离子(如Ca2+、Mg2+等)，使层析后的斑点形成拖尾。特别是被展开的化合物具有-COOH及酚-OH等基团时。

解决方法：采用纯净的酸来洗涤和处理吸附剂。展开剂可用精制的方法来除去金属离子。

（二）为什么番茄红素是红的而β-胡萝卜素是黄的？

胡萝卜素极性比番茄红素小所波长更短偏黄色；番茄红素极性大波长长接近红色 （三）展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有什么影响？

展开剂若高于样品点,会使本就少量的样品溶于展开剂,难以随展开剂的展开而分离.达不到分析的目的

五、注意事项

1、画线时要用铅笔和直尺，线迹要轻，手勿触及板面

2、点样要轻。根据样品浓度重复若干次。每次需点在同一圆心上，点样斑点直径在要小于2mm。重复点样时或展开时需先等斑点的溶剂挥干。 3、加环己烷时液面不得超过起始线。

4、当溶剂前沿上升到终点线时取出TLC板。

5、二氯甲烷挥发性较大，本实验采用挥发性较小的环己烷做提取剂，减少对实验室的污染。因两者不与水混溶，只有除水后才能有效从组织中萃取出类胡萝卜素。

6、点样时斑点要点的越小越好，点好的斑点直径应小于2mm，且不能过量，否则会造成展开后斑点拖尾或者相互覆盖。

7、若提取液的溶剂挥发了，可加几滴环己烷，振摇混合物，使样品溶解。 8、溶液不用时应避光保存，以防高度不饱和烃发生光化学氧化。

9、取出后应立即在展开液前沿做标记，否则等展开液挥发后，就无法确定展开液上升的高度。