《细胞生物学实验》教案

实验三 血型的鉴定（选做）

一、目的：掌握ABO血型鉴定的方法。

二、原理：根据lgM类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝

集反应的原理，用已知lgM类特异性标准抗血清与被检者红细胞在室温条件下反应，若被检者红细胞出现凝集现象，表明被检红细胞上有与血型抗体对应的抗原。

三、器材：载玻片、75%酒精、棉签、采血针

试剂：标准抗A、抗B血型定型试剂

（二）血型:

1、定义：根据红细胞膜表面上特异抗原（凝集原）的类型进行分类。 2、血型分类：ABO血型系统、Rh血型系统等

（三）ABO血型系统： 临床常见：A型、B型、AB 型和O型。

A 型 B 型 AB 型 O 型

红细胞凝集原 A B A、 B ／ 血浆的凝集素 抗B 抗A ／ 抗A、抗B （四） 血型鉴定的步骤

1、准备：载玻片的左上角编号。

2. 按标记所示分别滴加抗A、抗B血型定型试剂各一滴。

3. 采血：无名指指尖内侧。每边各加入受检者的全血1滴。用牙签搅拌使红细胞与抗体充分混匀。

3、原理：利用凝集反应原理鉴定血型

A + 抗A 凝集反应

B + 抗B 凝集反应

4. 观察和血型判读：如有凝集，则愈摇动，凝块愈大；无凝集红细胞可均匀分散。根据有无凝集现象报告结果。

注意事项：①每人每次使用一支采血针

②两根搅拌牙签不能相混

③观察有无凝集反应

[小知识]： 利用从绿咖啡豆中提取的酶，来清除掉B型血红细胞膜表面的多糖体，从而获得和O型血基本相同的红血球，这样就可以把B型血改变成了O型血，可用于紧急输血。

思考 1．某同学的血液跟A型标准血清发生凝集反应，但其血清遇A型血却不发生凝集

反应。问：该同学的血型是哪一种？

2．已知甲、乙、丙、丁四人中，只有甲、乙的血与B型标准血清发生凝集反应，

又知在紧急情况下，甲只能接受丁的血。问：甲、乙、丙、丁各是什么血型

3．有一对夫妇，父亲的血型为A型，母亲的血型为B型，其儿子却是O型，请问

这个儿子是不是这对夫妇所生的？说明理由。

1．答： AB型。

2．答： 甲是A型、乙是AB型、丙是B型、丁是各是O型。

3．有一对夫妇，父亲的血型为A型，母亲的血型为B型，其儿子却是O型，请问这个儿子是不是这对夫妇所生的？说明理由。

答： A型的基因型：AA和Ai

B型的基因型：BB和Bi AB型的基因型：AB O型的基因型： ii

① ♀ × ♂ ② ♀ × ♂

父母基因型： BB × AA Bi × AA

↓ ↓ ↓ ↓

产生配子： B A B、i A

子女基因型： A B A B Ai 子女血型： A B型 A B型 A型

③ ♀ × ♂ ④ ♀ × ♂

父母基因型： BB × Ai Ai × Bi

↓ ↓ ↓ ↓ 产生配子： B A、i A、 i B、 i

子女基因型： A B Bi A B Bi Ai ii 子女血型： A B型 B型 A B型 B型 A型 O型

这对夫妇有可能生出O型血的儿子。但O型血的这个儿子也还不一定就是这对夫妇所生。通常ABO血型的法医鉴定，只能作排除的检查，不能肯定就是。要想知道这个儿子是否亲生，最好还是做DNA鉴定，准确率达99%。

实验四 血涂片的制备和细胞计数（必做）

课前预习1．细胞计数的基本原理？

2．细胞计数与细菌计数的异同点？

一、实验目的

1．制备血涂片，观察了解血细胞的基本形态； 2．掌握细胞计数方法。 二、实验原理

细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数。细胞计数时，先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液，然后将细胞悬液滴入细胞计数板内，计数计数板上计数室四大格内的细胞数。根据计数室的容积及稀释倍数，即可计算出细胞浓度。

三、实验仪器、试剂及材料

1．材料：鸡一只

2．器材和仪器：显微镜、载片、盖片、吸水纸、手术器材、解剖盘、血球计数板、小平皿、牙签

3．试剂：0.9％生理盐水 四、实验步骤

1．制备10%的鸡血细胞悬液 2．鸡血涂片的制备与观察

取鸡血悬液，靠近一端滴在载片上，将另一载片的一端呈30-45°角紧贴在血滴的前缘，均匀用力向前推，使血液在载片上形成均匀的薄层 (图2－1)。晾干，显微镜下观察。

图2—1 血涂片的制备

3．细胞计数

1）制备鸡红细胞悬液：0.9％生理盐水按确定的稀释倍数制成10%鸡红细胞悬液。

2）熟悉血细胞计数板：血细胞计数板呈长方形，有2个计数室。每个计数室分为9个大正方格，每个大格边长为1mm，计数室的底与盖玻片间的距离为0.1mm，及每大格的容积为1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3。四角的每个大格被分为16 个中格；中央的大格被分为25 个中格，中央的每个中格又被分为16 个小格。

3）滴片：每人取1副血细胞计数板及1 张盖玻片，用布将盖玻片擦净，把盖玻片盖在血细胞计数板槽上，然后用吸管将制备好的鸡血细胞悬液混匀，吸取血细胞悬液，滴1 滴于血细胞计数板的盖玻片一侧边缘，使细胞悬液自然流入计数室内。

※ 注意：血细胞悬液不可滴的过多，如溢出或盖玻片内有气泡必须重做，否则将影响计数结果。该吸管加完样后不能再用。

4）计数：在低倍镜下按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。数出计数板上计数室四角四大格中的细胞数，如细胞压在格线上时，数上不数下，数左不数右。二次重复计数不应超过±5％。

五、实验结果

1．鸡血涂片的制备与观察