动物卫生复习资料

货主应当向输入地省、自治区、直辖市动物卫生监督机构申请办理检疫审批手续。

二、出入境动物检疫

为了维护国家主权和国际信誉，保护我国养殖业生产和人体健康，既不允许境外动物疫病传入，也不允许将动物疫病传出国境。为此，我国在对外开放的口岸和出入境动物业务集中的地点设立口岸出入境检验检疫机构，依法实施出入境动物检疫。国境口岸动物检疫可有以下几种情况。

（一）进出境检疫

我国规定，对向我国输入动物、动物产品或其他检疫物的，货主或者其代理人应当在进境前或者进境时向进境口岸出入境检验检疫机关报检；在输出报检时，应当提供贸易合同或者协议。输入或输出的动物和动物产品，应当由口岸出入境检验检疫机构实施检疫，经检疫合格的，准予入境或出境；不合格者依法分别处理。

我国规定，携带、邮寄国家明令禁止进境的动物、动物产品进境的，作退回或者销毁处理。携带国家规定禁止进境名录以外的动物、动物产品进境的，在进境时向海关申报并接受口岸出入境检验检疫机构检疫。邮寄国家明令禁止进境名录以外的动物、动物产品进境的，由口岸出入境检验检疫机构在国际邮件互换局实施检疫，经检疫合格者放行。

（二）过境检疫

我国规定，要求运输动物过境的，必须事先征得中国国家出入境检验检疫机构同意，并按照指定的口岸和路线过境。承运人或者押运人要持货运单和输出国家或者地区政府动物检疫机关出具的检疫证书，在进境时向口岸出入境检验检疫机构报检。过境的动物经检疫合格的，准予过境。出境口岸不再检疫。不合格者不准过境。

（三）运输工具检疫

口岸出入境检验检疫机关对来自动植物疫区的船舶、飞机、火车，无论是否装载物品，都必须依法实施检疫，可以登船、登机、登车实施现场检疫。必要时，进境的车辆，由口岸出入境检验检疫机构作防疫消毒处理。装载动物、动物产品出境的运输工具，应当符合动物检疫和防疫的规定，在装载前应当在口岸检疫机关的监督下进行消毒，发现危险性病原或者达不到国家标准的，进行除害处理后方可装运。

第四节 动物检疫处理

动物检疫处理是指对检出的患病动物及其污染环境的处理。做好动物检疫处理具有重要的意义。及时而合理地进行动物检疫处理，可以防止疫病扩散，不仅是动物防疫工作的重要措施，而且也是人类卫生保健工作的重要措施。只有做好检疫后的处理，才算真正完成了动物检疫工作的任务。所以，检疫处理是动物检疫工作的重要内容和环节。

一、动物检疫结果的分类

动物检疫结果有合格和不合格两类。 （一）合格动物及动物产品

通过动物检疫，符合产地检疫（或屠宰检疫）合格的出证条件，属于合格的动物及动物产品，应由官方兽医出具检疫证明。检疫证明包括书面证明（如动物检疫合格证明、动物产品检疫合格证明）、检疫印章和检疫标识。 （二）不合格动物及动物产品

通过动物检疫，不符合产地检疫（或屠宰检疫）合格的出证条件，属于不合格的动物及动物产品，对于不合格动物及动物产品，应由官方兽医出具《动物检疫处理通知单》，并按照有关规定及时而正确的处理。

二、动物检疫处理的方法

动物检疫处理的方法是根据检疫出疫病的种类而确定的，不同的检疫对象，采取不同的处理措施，但动物检疫处理都是针对传染源、传播途径和易感动物这三个基本环节进行的。

第四章 动物检疫技术

第一节 动物检疫方法

动物疫病有数百种，它们的发病有其共同的规律性，但各种疫病由于病原不同而各有其本身的特点，因此，我们必须综合应用有关理论和技术，探讨其共性和特殊性，对每种动物疫病做出迅速而准确的诊断。

为了正确的诊断疫病，必须掌握检查动物疫病的各种方法，常用的检疫方法有流行病学调查法、临诊检查法、病理学检查法、病原学检查法、免疫学检查法等，近年来分子生物技术也在动物检疫中得到了比较广泛的应用。这些方法并不是诊断每一种疫病都要使用，而是根据不同的情况，应用其中的几种方法。

一、流行病学调查

流行病学调查是指某种疫病发生后在疫区内对该病的感染和发病情况、传染来源、传播途径及各种自然因素和社会条件所进行的了解、观察和分析。实际是对所发生的疫病和与之相关的各种因素的全面调查。动物检疫人员应深入现场，经过仔细观察和调查，获得第一手资料，再经过认真的分析，一方面对流行病学作做出正确的判断，另一方面及时采取合理的防疫措施，尽快控制传染病的蔓延最终将其消灭。

（一）产地检疫和市场检疫监督中的流行病学调查

1.当前疫情调查 一是查清当前疫病的发病时间、地点、蔓延过程、流行范围和分布；二是查清有关数率，即疫病流行区内各种动物的数量、发病动物的种类、数量、性别、年龄、感染率、发病率、患病率、致死率、死亡率。

2.疫情来源的调查 一是进行本地调查，即本地是否以往发生过该种疫病，若发生过，当时流行情况和防制措施，有无养殖档案相关记录可查；二是进行邻地调查，当本地以往未发生过该病时，可调查邻地是否发生了该疫病；三是现场调查，即此次发生疫情前，是否从外地引进过畜禽、畜禽产品以及饲料等，所引进畜禽的原输出地是否发生过类似的疫病。 3.传播途径的调查 一是调查饲养管理，即当地饲养管理方法、放牧情况、畜禽流动情况以及采购情况；二是调查当地畜禽卫生防疫情况；三是调查当地疫病的传播因素。

4.自然与社会情况的调查 自然情况包括发病地区的地形、河流、气候、昆虫、野生动物以及交通状况等；社会情况包括当地人民生产、生活情况，有关干部、业务技术人员及有关人员对疫情的态度等。

（二）出入境检疫、运输检疫监督和宰前检疫的流行病学调查

出入境检疫、运输检疫监督和宰前检疫中的流行病学调查内容基本相同，主要有以下4个方面：

1.产地情况的调查 一是调查畜禽的来源、品种、年龄、性别；二是调查产地疫情情况；三是调查免疫接种情况。

2.采购地情况的调查 一是调查采购地有无疫情；二是调查采购、集中、圈养和中转过程中，有无发病和死亡；三是调查何时何地经过何种检疫。

3.运输情况的调查 一是调查运出时间、运输方式、途中饲养情况和动物健康情况；二

是调查途经的地点及沿途有无疫情。

4.疫情动态的调查 一是调查所在地疫情动态；二是了解邻近地区疫情动态；三是了解国内其他地区疫情动态；四是了解国际疫情动态。

五、免疫学检查

是利用抗原和抗体特异性结合的免疫学反应进行诊断。用于检疫的免疫学法主要有血清学试验和变态反应法。

（一）血清学试验

血清学试验可采用已知抗体来鉴定未知抗原，当未知病原（抗原）与已知特异性抗体结合后，会表现出可见反应，以这些可见反应来指标被检病原的属、种、型。如猪口蹄疫和猪传染性水疱病的反向间接红细胞凝集试验，就是用已知的抗体来检测未知的病毒或毒型，确定是猪传染性水疱病或是口蹄疫以及口蹄疫病毒的型。

血清学检查法也可用已知的抗原来检测未知的抗体（血清）。如布鲁氏菌病凝集试验，就是用已知的抗原来检测被检血清，而确定是不是患有布鲁氏菌病。

由于血清学试验的特异性强、敏感性高，可为确诊提供可靠依据，故在传染病的检疫中被广泛应用。常用的有凝集试验、琼脂凝胶免疫扩散试验、补体结合试验、红细胞凝集试验、中和试验等，还有酶联免疫吸附试验、免疫酶技术、免疫荧光技术、免疫电镜技术、单克隆抗体技术、放射免疫分析等技术，为动物疫病的检疫开辟了广阔的途径。

（二）变态反应法

某些疫病在传染过程中引起以细胞免疫为主的第Ⅳ型变态反应，这种变态反应是由病原体或其代谢产物在传染过程中作为变应原而引起，具有很高的特异性和敏感性。因此，常用变态反应法进行动物疫病的检疫，例如细菌性疫病中的结核病、鼻疽、布鲁氏菌病，病毒性疫病中的疱疹病毒病，真菌性疫病中的流行性淋巴管炎，寄生虫病中的血吸虫病等。

六、分子生物学技术检查

（一）核酸探针技术

核酸探针是指带有标记物的已知序列的核酸片段，它能与其互补的核酸序列杂交，形成双链，所以可用于待测核酸样品中特定基因序列的检测。每一种病原体都具有独特的核酸片段，通过分离和标记这些片段就可置备出探针，用于检测任何特定病原微生物，并能鉴别密切相关的毒（菌）株和寄生虫。

核酸杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术较为常用，先将待测核酸结合到一定的固相支持物上，再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜（nitrocellulose filter membrane，简称NC膜）或尼龙膜（nylon membrane）。

固相杂交包括膜上印迹杂交和原位杂交。其中膜上印迹杂交技术应用最为广泛，它包括三个基本过程：首先是通过斑点印迹（dot-blot）或southern印迹（southern blot）的核酸印迹技术将核酸片段转移到固相支持物上，然后用标记探针与支持物上的核酸片段进行杂交，最后进行杂交信号的检测。

（二）PCR技术

PCR即聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR），其原理是在模板DNA、引物和4种脱氧单核苷酸存在的条件下，依赖于耐高温的DNA聚合酶的酶促合成反应。PCR以欲扩增的DNA作为模板，以与模板正链和负链末端互补的两种寡核苷酸做为引物，经过模板DNA变性、模板引物复合性结合，并在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应来合成新的模板DNA。模板DNA变性、引物结合（退火）、引物延伸合成DNA这三步构成一个PCR循环。每一循环的DNA产物经变性又成为下一个循环的模板DNA。这样，目的DNA数量将以2n－2n的形式积累，在2h内可扩增30（n）个循环，DNA量就可达到原来的百万

倍。扩增产物可通过凝胶电泳、southern杂交或DNA序列分析进行检测。

PCR技术主要用于传染病的早期诊断和不完整病原检疫，还可鉴别比较近似的病原体，如蓝舌病病毒与流行性出血热病毒，不同种类的巴贝斯虫等。

（三）限制性核酸内切酶图谱分析

限制性核酸内切酶图谱分析（Restriction endonuclease analysis，REA）技术通过酶切消化微生物DNA，然后电泳染色呈现大小不一的片段，对这些片段的迁移率及数量进行分析，便可了解到病原微生物遗传物质的一定特性，在此基础上采用双酶切割或杂交等方法，则可推测出片段的排列顺序和酶切位点，从而推断出DNA间存在的相似性或差异性，是病原变异、毒株鉴别、分型及了解基因结构和进行流行病学研究的有效方法，对动物检疫具有很重要的实用意义，尤其对出入境动物及动物产品携带病毒是疫苗毒还是野毒，以及推断是本地毒还是外来毒有很重要的意义。

（四）寡核苷酸图谱分析

寡核苷酸图谱分析是指核酸或核酸片段经T1核酸酶切割后电泳，少数较大分子量的酶切核酸片段在聚丙烯酰胺凝胶上分布特点的比较。因为它是通过少数核酸片段来了解整个核酸的特征，如同根据指纹特点判断案情一样，因此又称为指纹图分析（Analysis of fingerprint map）。有人已从我国猪群中分离到1株丙型流感病毒，还应用于口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、脊髓灰质炎病毒、禽反转录病毒、马脑脊髓炎病毒、水疱性口炎病毒、轮状病毒等研究。其分析结果有时被仲裁机构作为处理经济纠纷的依据。

（五）核酸序列分析

核酸是生命的遗传物质，遗传信息存在于4种单核苷酸（A，G，C，T/U）按不同顺序连接而成的核酸分子中，迅速准确地解读决定生命性状的密码，测定基因组的核酸序列，对于识别病原，揭示疫病变化规律是任何方法都不可相比的，但它是最烦琐和最复杂的检测技术，目前在动物检疫中尚不多采用。

（六）限制性核酸片段多态性分析

每一限制性核酸内切酶在切割DNA 分子时都有固定的切点顺序，DNA分子中核苷酸排列顺序的变化有可能使该切点丢失或增加。由于不同的生物群体的DNA序列千差万别，因而用同一限制性内切酶消化后，所得DNA片段的长度分布也是千变万化的。这种酶切片段长度分布的多样性就称为限制性片段长度多态性（Restriction fragment length polymorphism，RFLP）。RFLP主要用于生物群体的遗传分析，但也可用于动物检疫中病原体的检测。在研究肾脏钩端螺旋体分型时，采用RELP技术几乎可将肾脏钩体型内各血清亚型区分出来。DNA扩增片段长度多态性分析（Amplification fragment length polymorphism，AFLP）、聚合酶链反应/限制性片段长度多态性分析法（PCR/RFLP）和随机扩增多态性DNA（RAPD），可用于对多种病原微生物进行分类和鉴定。

（七）基因芯片技术 基因芯片技术是一种高效、快速，同时测定基因组成千上万个基因活动的新技术，能用于揭示所有的基因转录表达层次上的信息。基因芯片（gene chip）又叫DNA芯片或DNA微阵列，是指采用原位合成或显微打印手段，按特定的排列方式固定了数以万计的基因探针/基因片段的硅片、玻片或塑料片。

该项技术首先由美国的Affymetrix公司于1994年发明。基因芯片技术是高效地大规模获取相关生物信息的最有效的手段。该项技术是融合微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术，其迅猛发展和优越性引起了生命科学领域乃至整个科学领域的普遍重视，甚至革命性的变革，在临床疾病诊断，药物筛选和新药开发，基因功能研究，环境保护，农业和畜牧业等方面，具有十分诱人的应用前景。

（八）生物传感器技术

生物传感器是将各种生物分子探针表面的生化反应转变成可定量测定的物理信号的一