基因工程原理练习题及答案

45．关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( ) (a)给外源DNA添加适当的切点 (b)人工构建载体 (c)调整外源基因的可读框 (d)增加调控元件 46．cDNA文库包括该种生物的( )

(a)某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因 (c)所有结构基因 (d)内含子和调控区

47．下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( ) (a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA (b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA (c)以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA (d)新合成的双链DNA甲基化

48．下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的? ( ) (a)操作方便 (b)易于回收片段

(c)易于定向重组 (d)载体易于自身环化，降低重组率 49．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( ) (功具有可诱导性 (b)具有可转移性

(c)细菌生长的任何时期都可以出现 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的 50．下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中( )是不正确的。

(a)既能标记DNA，又能标记RNA (b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA (c)只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端 (d)DNA或RNA必须有5'-OH的存在 51．Southem印迹的DNA探针( )杂交。

(a)只与完全相同的片段 (b)可与任何含有相同序列的DNA片段 (c)可与任何含有互补序列的DNA片段’．

(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e)以上都是 52． 用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。 (a)Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c)Western印迹 (d)原位菌落杂交 53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( )

(a)用限制酶消化DNA (a)DNA与载体的连接

(c)用凝胶电泳分离DNA片段 (d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上 (e)用一个标记的探针与膜杂交 54． 报告基因( )

(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列 (b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区

(c)能用于检测启动子的活性 (d)能用于确定启动子何时何处有活性 55． 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( ) (a)诱导宿主的α肽的合成 (b)诱导宿主的ω肽的合成 (c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂 56. 切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。 (a)DNA聚合酶I，RNA (b)DNA聚合酶I，DNA (c)DNA聚合酶Ⅲ，RNA (d)DNA聚合酶Ⅲ，DNA 57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( ) (a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原

58．Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是：( ) (a)用RNA探针检测DNA片段 (b)用RNA探针检测RNA片段 (c)用DNA探针检测RNA片段 (d)用DNA探针检测蛋白质片段 59．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )

(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达

(c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)根据DNA同DNA的杂交 60．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( )

(a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的 (b)不需要用Dnase I预处理 (c)反应时可用Klenow酶 (d)反应时可用DNA聚合酶1 61．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )

(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)DNA聚合酶Ⅱ (d)DNA聚合酶Ⅲ 62．要对一双链的DNA分子进行31末端标记，可用( )

(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)T4DNA聚合酶 (d)T7DNA聚合酶

1、 质粒的构型中，线性L型是最简单的构型，因而，电泳时，泳动的速度最快。(×) 2、 甲基化酶和DNA连接酶均需要引物。(×) 3、 转化子就是重组子。(× )

4、 重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和过氧化物酶。(×) 5、 载体自主复制是基因工程扩增基因的依据。(√)

6、 只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达。(× ) 7、 启动子与克隆基因间的距离对基因表达有影响。(√)

1、基因工程所用的工具酶有 核酸酶、聚合酶、连接酶、修饰酶 四大酶类。

2、限制性内切酶1U酶定义为 在建议使用的Buffer及温度下，在20μl（50μl）反应体系中反应1小时，使1μg入DNA完全消化所需的酶量 ，weiss和TNB为 连接酶 酶活性单位。

3、在抽提DNA中，酚的作用是 去除蛋白 ，氯仿的作用是 增加比重，有助于分相 。 加入异戊醇的作用是 防止起泡把DNA碰断，同时有助于离心后界面更清晰 。 4、限制性内切酶识别序列具有 旋转对称，反向重复 结构特征。

5、质粒有 严紧型 和 松弛型 两种类型，在克隆基因中常用的是 松弛 型，在表达研究中常用的是 严紧 型。

6、在沉淀DNA时，常用 2 倍体积的无水乙醇。若反应体系中无单价离子存在，常加入1/10体积的3MNaAc或KAc,其作用是 中和DNA上的负电荷，减小排斥力，使其易于沉淀 。 7、为提高重组转化效果，对同一种酶切后载体进行 脱磷 处理。

8、在制备感受态细胞时，为了提高转化率，常用冰冻的 CaCl2处理 和短暂的 420C热击处理 。

9、当目的片段无限长时，使用识别碱基数为4和6的限制性内切酶进行切割时，理论上产生的片段数之比是 16：1 。

10、DNA分子标记的方法有缺口平移法、随机引物法、末端标记法、交换反应标记法 四种。 11．DNA带 负 电荷，在电场中从 负 极向 正 极移动。 三、判断题

1、双酶切不需脱磷，单酶切一定要脱磷。（对）

2、在基因工程实验中，为了保证实验成功，所有的器具包括枪头、培养皿和所有试剂都需要高温高压灭菌。（错） 3、不同构型质粒电泳的速率判断。超螺旋>线性>开环

4、无水乙醇消毒效果最好，但价格昂贵，因此用70%酒精消毒。（错） 5、酶切后的载体和目的片段（不用脱）都必须脱磷。（错） 6．重组子一定是转化子，转化子不一定都是重组子。（对）

答案 1．70

2．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达 3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 4．限制性酶切图谱

5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名 6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积 7．EcoK；EcoRl

8．GGCC；异源同工酶

9． 枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶 10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团 11． Ca2+

12． 5'-3'合成； 3'-5'外切

13． DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶 14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平 15．核酸水解酶H；RNA

16． 质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体

17． 复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA的插入 18． 质粒消除(或治愈)

19， pMBl； pSCl01；pSF2124(R质粒) 20． 1000kb；300kb 21. 严紧

22． pBR322和M13；pMBl；转座子

23． 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如?噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽

24． 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记 25．质粒；?噬菌体； 45

26． (1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记 27．复制区； IG区 28．75％～105％

29． 螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性

30． 中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力

31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析 32．T—载体

33．第二链合成时形成的发夹环? 34．乙醇使DNA分子脱水

35．(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号 36．接受外源DNA的生理状态

37．(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法 38． 基因组DNA克隆； 基因组DNA文库 39．cDNA克隆；cDNA文库 40．聚合酶链式反应(PCR) 41．0?C；42?C

42．(1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法 43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选 44．基因组DNA；cDNA

45．Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶

46．(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针 47．外源基因是否进行了转录

48．两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而 在另一个细胞群体中不能表达这些基因 49．Northern印迹 50．Southern印迹

51．5’?3’合成酶；3’ ?5’外切核酸酶

52．(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子

53．(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件 54．(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记 答案

1．c；2．c； 3．b； 4．b 5．b，C，d，e； 6．c； 7．b； 8．d；9．d； 10．B； 11．d； 12．a； 13．d； 14．b 15．d； 16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C； 23．b； 24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c； 29．b；30．a；31．c； 32．a,c,d,e， 33．a，b，c；34．b； 35．c；36．c； 37．d； 38．b；39．c；40．a；41．c； 42．a，b，c； 43．b； 44．b； 45．d； 46．a；47．a； 48．c； 49．c；50．b；51．c； 52．c； 53．b； 54．a,c,d；55．a； 56．b；57．a，b； 58．c；59．a；60．d；61．b； 62．c；