微生物思考题总结

1. 微生物：是一切体形微小单细胞或个体结构简单的多细胞，甚至没有细胞结构的低等生物的统称。

2. 种（species）：是一个基本分类单位；是一大群表型特征高度相似、亲缘关系极其接近，与同属内其他种有明显差别的菌株的总称。

3. 菌株（strain）: 表示任何由一个独立分离的单细胞繁殖而成的纯种群体及其一切后代菌株强调的是遗传型纯的谱系

4. 微生物分类：原核生物：真细菌(放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、蓝细菌)、古细菌 真核生物：酵母菌、霉菌、原生动物、单细胞藻类

非细胞结构生物：病毒、 亚病毒(类病毒、拟病毒、朊病毒)

5. 观察细菌形态时，为什么要用染色法，常用的染色方法有几种？

一般微生物菌体小且无色透明，在光学显微镜下细胞体液及结构的折光率与其背景相差很小，因此用压法或悬滴法进行观察时，只能看到其大体形态和运动情况，若要在光学显微镜下观察其细致形态和主要结构，一般都需要对他们染色，从而借助颜色的反衬作用提高观察样品不同部位的反差。

细菌染色法：活菌：用没蓝或TTC等做活菌染色 死菌：1 负染色(背景着色法)【荚膜染色】 2 正染色：简单染色法(形态)和鉴别染色法(结构)（革兰氏染色法、抗酸性染色法、芽孢染色法、）

7. 原生质体：通过溶菌酶去除细胞壁或使用青霉素抑制细胞壁合成，而得到的仅有细胞膜包裹的圆球状渗透敏感细胞。

8. 球状体：还残留着部分细胞壁的圆球状渗透敏感细胞

9. L型细菌：通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株。

10. 支原体：在长期进化过程中形成后适应自然生活条件的无细胞壁的原核生物 11. 糖被：包被于某些细菌细胞壁外地一层厚度不定的胶状物质被称糖被

12. 芽孢：某些细菌在某生长发育后期，在细胞，内形成一个圆形或椭圆形，厚壁 含水量极低 抗逆性极强的休眠体

13. 伴孢晶体： 少数芽孢 杆菌在形成芽孢的同时，会在芽孢旁边形成一个菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体称伴胞晶体。

14. 菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长繁殖带一定程度可以形成肉眼可见的，有一定形态结构的子细胞生长群体。

15. 假丝酵母：有些酵母菌与其子代细胞在一起成为链状，称为假丝酵母

16. 芽殖：一个酵母能形成的芽数平均24个出芽方式：多边出芽、两端出芽、三边出芽、单边出芽 17. 革兰氏染色的主要步骤和关键步骤各是什么，机理如何

主要步骤： 方法：结晶紫初染→碘液媒染→乙醇脱色→番红复染→油镜观察 关键步骤：脱色 脱色长短会影响菌体的鉴别 （假阳性和假阴性）

机理： 初染时结晶紫透过细胞壁进入细胞，媒染所用的碘液与结晶紫反应生成不溶性的复合物，但这种复合物可以溶于乙醇。当用乙醇脱色时，G-中的复合物被洗去，但在G+中由于存在厚厚的肽聚糖，乙醇使肽聚糖脱水以致肽聚糖层空隙变小 复合物无法通过细胞壁而存在细胞中使细胞仍呈现紫色。番红复染将G-染成红色，G+的紫色覆盖红色仍呈现紫色。

18. 芽孢是如何形成的，其耐热机制是什么

芽孢的形成分为7个阶段：DNA浓缩，束状染色质形成、隔膜的形成(前芽孢的双成隔膜)、前芽孢形成 细胞发生不对称分裂，小体积部分为前芽孢、 皮层形成、芽孢衣形成、芽孢合成完成、芽孢

裂解 机制：芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差和皮层的离子强度很高，皮层有极高的渗透压，夺取核心部分的水分，造成皮层充分膨胀，核心部位生命物质高度失水，从而具有极高的耐热性 19. 溶酶菌和青霉素的作用点

溶菌酶作用细菌壁肽聚糖二塘的B-1-4糖苷键 青霉素使细胞壁中肽聚糖的肽桥无法连接 20. G-细菌LPS层功能，其稳定性与什么有关

①构成某些革兰氏阴性细菌致病物质—内毒素的物质基础；②起细菌自我保护作用.③重要的抗原因子；④是许多噬菌体吸附的受体。⑤吸附Mg2+、Ca2+等阳离子以提高其在细胞表面浓度的作用。 LPS层的稳定性与Ca2+有关，如果用EDTA等螯合剂去除Ca2+和降低离子键强度，就会使LPS解体。 21. 如何通过实验方法确定细菌有无鞭毛

从固体形态培养基上的菌落形态判断：该菌长出的菌落大，薄且不规则，边缘也不圆整，说明有鞭毛；反之，外形圆整，边缘光滑，厚度较大则说明无鞭毛。半固体琼脂穿刺培养：若穿刺线周围有呈浑浊的扩散区则说明有鞭毛。特殊鞭毛染色法：是染料沉积在鞭毛上，用光学显微镜观察加粗后的鞭毛。暗视野具滴法：根据其运动方法用光学显微镜判断其有无鞭毛。电子显微镜(最直接的方法) 22. 细菌、酵母菌、霉菌的菌落各有何特点，掌握这些知识有何实际意义

细菌：较小，湿润，易被接种环挑起球菌形成隆起菌落，有鞭毛细菌常形成不规则菌落，具有荚膜的细菌菌落表面较透明，边缘光滑整齐，有芽孢的细菌菌落表面干燥皱着

酵母菌菌落与细菌菌落相似但较大较厚，菌落表面湿润粘稠，易被挑起，多为乳白色

霉菌：较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状绒毛状或棉絮状，菌落与培养基接触紧密不易挑取，菌落正反面及中心与边缘颜色常不一致

不同微生物在特定培养上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定特征，可成为对该微生物鉴别分类的重要依据

23. 比较细菌、酵母菌、霉菌细胞壁的特殊成分，设想他们的原生质体的制备方法

细胞壁成分的异同：细菌分为G+和G-，G+肽聚糖含量高，G-含量低；G+磷壁酸含量较高，而G-不含磷壁酸；G+类脂质一般无，而G-含量较高；G+不含蛋白质，G-含量较高。放线菌为G-，其细胞壁具有G-所具有的特点。酵母菌和霉菌为真菌，酵母菌的细胞壁外层为甘露聚糖，内层为葡聚糖；而霉菌的细胞壁成分为几丁质、蛋白质、葡聚糖。

原生质体制备方法：G+菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶 。 G-菌原生质体获得：EDTA鳌合剂处理，溶菌酶 。 放线菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶。霉菌原生质体获得：纤维素酶。酵母菌原生质体获得：蜗牛消化酶。 24. 比较原核生物和真核生物的异同

真核生物有核膜包被，原核生物没有。真核生物有线粒体、叶绿体、高尔基体、核糖体等，原核生物只有核糖体。原核生物细胞较小，而真核生物较大。原核生物细胞壁多为肽

聚糖而真核生物为纤维素。原核生物细胞质不流动 真核生物流动 26. 真菌孢子的类型

分为无性孢子和有性孢子，有性孢子（卵孢子，接合孢子，子囊孢子，担孢子），无性孢子（孢囊孢子，分生孢子，节孢子，厚壁孢子）其中，担孢子节孢子厚壁孢子分生孢子为外省，其他为内生 27. 试比较营养物质进入微生物细胞的几种方式的基本特点

自由扩散：又浓度高的地方向浓度低的地方扩散，不需要载体和ATP

协助扩散：不受浓度的限制，需要载体不需要ATP

主动运输：不受浓度的限制，需要载体和ATP 内吞外排：通过细胞膜的流动性而运输大分子物质

28. 什么是培养基？用于固体培养基的凝固剂有几种。为什么说琼脂的最好的凝固剂。培养自养微生物常用什么做凝固剂，为什么？

定义：由人工配制的、适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物用的营养基质（混合养料）。 用于固体培养基的凝固剂有：琼脂、明胶、硅胶 不能不为微生物分解；不因消毒灭菌被破坏，在为生物生长温度内保持固态，凝固点温度不能太低，对微生物无害，透明度好，粘着力强。

培养自养微生物常用明胶，因为明胶不含有机物

29. 微生物在培养基中，pH为什么会发生改变，如何保持培养基中pH的相对稳定？

微生物在生长繁殖和积累代谢产物过程中，培养基PH会发生如下变化：1.如微生物在含糖基质上生长，会产酸而使PH下降2.微生物在分解蛋白质和氧基酸时，会产NH3而使PH上升。3.以（NH4）2SO4作N源，会过剩SO42-，而使PH下降。4.分解李永阳离子化合物如：NaNO3,会过剩Na而使PH上升。

为了维持培养基PH值得相对恒定，常常在培养基中加入缓冲液物质如磷酸盐，碳酸盐，以缓和PH变化的剧烈。或加酸加碱

30. 微生物的营养类型分几种，主要划分依据是什么？ 1．光能无机自养型（光能自养型）

能以CO2为唯一或主要碳源； 进行光合作用获取生长所需要的能量；以无机物如H2、H2S、S、H2O等作为供氢体或电子供体，使CO2还原为细胞物质； 2．光能有机异养型（光能异养型）

不能以CO2为主要或唯一的碳源；以有机物作为供氢体，利用光能将CO2还原为细胞物质；在生长时大多数需要外源的生长因子； 3．化能无机自养型（化能自养型）

生长所需要的能量来自无机物氧化过程中放出的化学能；以CO2或碳酸盐作为唯一或主要碳源进行生长时，利用H2、H2S、Fe2+、NH3或NO2-等无机物作为电子供体使CO2还原成细胞物质。 4.化能有机异养型（化能异养型）

碳源是有机物，有机物作为电子传体所用能源为化学能

31. 天然培养基：含化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物 32. 组合培养基：由化学成分完全了解的物质配制而成

33. 选择培养基：根据某种或某一类群微生物的特殊营养需要或对某化合物的敏感性不同而设计出来的培养基

34. 鉴别培养基：在普通培养基中加入能与某代谢产物发生反应的指示剂或化学药品，而产生某种明显的变化

35. 简述微生物的营养要素，在配制培养基时，一般选择哪些物质？ 微生物的营养物质要素有五类：碳源，氮源，无机盐，生长因子和水

在实验室一般用牛肉膏蛋白胨培养细菌 一般用麦芽汁培养基培养酵母菌 一般用高氏一号合成培养基放线菌 一般用查氏合成培养基培养霉菌 36. 现有的微生物保藏方法分几类，保藏原理各是什么？

低温保存：菌种管置于4C冰箱保存定时传代；原理：低温下微生物代谢强度明显下降 石蜡油低温保存：橡胶塞风口或覆盖石蜡油；原理：降低微生物的代谢水平

液氮超低温保存法：菌种置于保护剂中预冻后保存在液氮超低温冰箱内(-196C,50年)；原理：微生物处于冷冻状态代谢作用停止（是用于各种微生物）

干燥保存法：将菌种置于土壤 滤纸 细沙 硅胶等干燥材料上保存；原理：微生物处于干燥状态下生命活动处于休眠状态（适用于保存放线菌，芽孢菌和其他真菌保存）

真空冷冻干燥法：加油保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空保存；原理：微生物处于干燥缺氧及低温状态下生命活动处于休眠

37. 一般来说，严格的无菌操作是一切微生物学工作的基本要求，但在分离与培养极端嗜盐菌时，常在没有点酒精灯的普通试验台上倾倒培养平板，在日常生活中直接打开皿盖观察和挑取菌落，而其研究结果并没有因此受到影响，这是为什么？

培养极端嗜盐菌的培养平板需要添加很高浓度的氯化钠，实验室环境中的一般微生物都不能在这种选择培养基上生长，因此在实验过程中即使不采用无菌操作技术，实验结果仍不会受到影响 38. 如果希望从环境中分离得到厌氧固氮菌，该如何设计实验？

（1）根据选择分离的原理设计不含氮的培养基，在这种培养基上生长的细菌，其氮素应来自固氮作用。（2）将环境样品（例如土样）稀释涂布到选择平板上，放置于厌氧罐中。对厌氧罐采用物理、化学方法除去氧气，保留氮气。培养后在平板上生长出来的细菌应是厌氧固氮菌或兼性厌氧固氮菌。（3）挑取一定数量的菌落，对应点种到两块缺氮的选择平板上，分别放置于厌氧罐内、外保温培养。在厌氧罐内外均能生长的为兼性厌氧固氮菌，而在厌氧罐外的平板上不能生长，在厌氧罐内的平板上生长的即为可能的厌氧固氮菌。

39. 与促进扩散相比，微生物通过主动运输吸收营养物质的优点是什么？

在于可以逆浓度运输营养物质。通过促进扩散将营养物质运输进入细胞，需要环境中营养物质浓度高于胞内，而在自然界中生长的微生物所处环境中的营养物质含量往往很低，在这种情况下促进扩散难以发挥作用。主动运输则可以逆浓度运输，将环境中较低浓度营养物质运输进入胞内，保证微生物正常生长繁殖。

40. 以伊红美蓝（EMB）培养基为例，分析鉴别培养基的作用原理。

鉴别性培养基是在培养基中加入能与某菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从肉眼就能将其与其他外形相似的菌落区分。EMB培养基中大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色。从菌落表面反光还可看到绿色金属闪光。而产酸弱的菌株的菌落呈棕色。不发酵乳酸的菌落无色透明。 41. 以大肠杆菌烯醇丙酮磷酸-磷酸糖转移酶系统（PTS）为例解释基团转位。

大肠杆菌PTs由5种蛋白质(酶I、酶Ⅱa、酶Ⅱb、酶Ⅱc及热稳定蛋白质Hn)组成，酶Ⅱa、酶b、酶Ⅱc 3个亚基构成酶Ⅱ。酶I和HPr为非特异性细胞质蛋白，酶Ⅱa也是细胞质蛋白，亲水性酶Ⅱb与位于细胞膜上的疏水性酶Ⅱc相结合。酶Ⅱ将一个葡萄糖运输进入胞内，磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)上的磷酸基团逐步通过酶I和HPr的磷酸化和去磷酸化作用，最终在酶Ⅱ的作用下转移到葡萄糖，这样葡萄糖在通过PTs进入细胞后加上了一个磷酸基团。

42. 某学生利用酪素培养基（见表4-13）平板筛选产胞外蛋白酶细菌，在酪素培养基平板上发现有许多菌的菌落周围有蛋白酶水解圈，是否能仅凭蛋白水解圈与菌落直径比大，就断定该菌株产胞外蛋白酶的能力就大。而将其选择为高产蛋白酶的菌种？为什么？

不能。因为，(1)不同微生物的营养需求、最适生长温度等生长条件有差别，在同一平板上相同条件下的生长及生理状况不同；(2)不同微生物所产蛋白酶的性质(如最适催化反应温度、pH、对底物酪