分子药理学考试提纲

血管内皮细胞凋亡的机理 （张建军）

1、 细胞凋亡和坏死的区别

细胞凋亡与坏死可以从概念?形态?生化等方面进行区分?

凋亡是一种受基因调节的自主控制过程，在生物个体发育和生存中起着非常重要的作用；而坏死则是细胞处于剧烈伤害性条件下发生的细胞死亡。在体内，两者最大的区别是前者不引起机体炎症反应，而后者则可引起炎症反应。 特征 诱发刺激因素 细胞凋亡 细胞坏死 生理性（内源性信号和细病理性 胞内信号）和病理性 死亡形式 细胞大小变化 单个细胞 周围一片细胞 缩小一细胞皱缩和形成凋增大一细胞肿胀并溶解 亡小体 细胞膜变化 线粒体 保持完整 出泡 光滑，早期即水解消失 膜通透性增加，释放肿胀 无序结构 CytC;Apaf1结构保持相对完整 细胞器形状 细胞核 收缩 “凋亡小体” 肿胀 破损 染色质凝聚、裂解成碎片，核膜破裂 着边 DNA裂解 片段化，核小体间断裂，随机裂解 游离3’末端，梯状DNA电泳图谱 细胞瓦解 吞噬作用，无炎症反应 炎症反应，巨嗜细胞

2、检测方法：

（1）凋亡细胞形态学特征的检测：

普通光镜下(可通过HE染色)，荧光显微镜(采用相应的荧光染料标记，如PI、Hochst33342) 透射电镜（可鉴定出完整的细胞器、胞浆起泡、染色质浓缩和核碎裂）

（2）凋亡细胞生化特征检测方法：

a.琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段，凋亡细胞呈现DNA ladder电泳图谱。 b.原位末端标记技术，标记断裂DNA。 c.ELISA检测

（3）流式细胞仪检测：通过检测凋亡峰或者AnnexinV-FITC/PI双染鉴别死亡和凋亡细胞。

（4）激光共聚焦显微镜：荧光标记后采用激光共聚焦显微镜检测可以定性和定量分析凋亡

3、凋亡在正常生理状态中的作用？

答：细胞凋亡(apoptosis)是多细胞生物维持自身稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡,又称为程序性细胞死亡(programmedcelldeath,PCD)?机体通过细胞凋亡消除损伤?衰老与突变的细胞,以维持生理平衡,是一种主动的?有程序的细胞死亡过程?细胞凋亡的生物学功能包括：清除无用的或多余的细胞，除去不再起作用的细胞，除去发育不正常的细胞和除去一些有害细胞细胞凋亡的研究表明,它与胚胎发育?器官的发育与退化?免疫?造血?细胞群体稳定等生理过程有着极其重要的关系,并在AIDS?肿瘤的发生和治疗中起着重要作用?

4、诱导凋亡最基本的原因是什么？

答：细胞凋亡是各种内外因素激活了细胞自身固有的程序。参与细胞凋亡的物质本身存在于细胞浆中,而不需要转录合成这些成分，但在凋亡过程中需要某些基因的改变,蛋白质的合成以激活或抑制此通路中的环节,从而起到调节的作用?能传递凋亡信号的蛋白,利用蛋白质上的一些结构域将信号传递至凋亡的执行者—凋亡蛋白酶（半胱氨酸蛋白水解酶家族，caspases）,此酶的激活将导致一系列caspases级联效应,最终引起细胞凋亡。但抑制caspases的作用并不能完全阻断由促凋亡因子引起的细胞凋亡。

诱导细胞凋亡的因素有内源性的和外源性的因素。内源性的因素包括细胞凋亡诱发机制（如Ｆas配体、肿瘤坏死因子等）的激活和抑制机制（生长因子、激素、受体因子等增殖性因子）的失活。外源性的因素包括放射线、热休克等物理性因素，药物、毒物等化学性因素以及病毒、细菌等生物学因素。近年来还发现活性氧以及一氧化氮在神经系统疾病、心血管疾病、免疫性疾病及老化等方面的作用都不同程度地与细胞凋亡有关。

离子通道和抗心律失常药理 （王晓良） 1.Na+、K+、Ca2+离子通道的分类 答：钠离子通道：

钠离子通道广泛分布于可兴奋细胞中，现已克隆出至少9种类型的钠通道，其中多数对河豚毒素(TTX)敏感，心肌细胞中存在的一种主要类型的的钠通道（h1型）对TTX的敏感性较低（比其他钠通道亚型低约200倍）。

神经元和骨骼肌的钠通道α亚基与β1、β2亚基相连，β亚基被认为与钠通道的失活有关。心肌钠通道的α亚基却不与β亚基相连，单独的α亚基即可表达完整的通道功能。心肌钠通道的α亚基同样有四个跨膜区，每个区又包含6个跨膜肽段（S1-S6），其中S5-S6是形成亲水孔道而有选择性让离子通过的部分，称“孔道区”或P区，S4含一些带正电荷的氨基酸，在膜电位变化时可在膜内移动，认为是电压感受器。TTX是一种特异性很强的钠通道阻断剂，心肌的钠通道对TTX不敏感，其原因可能是P区的结构不同。 钾离子通道分型：

1. 延迟整流钾通道(Kv)：广泛分布各种组织，尤其心肌细胞中，去极化激活的

外向电流，主要特点：激活是电压和时间依赖的，基本无自动灭活，除非细胞膜复极化。

主要功能：启动但不参与细胞的整个复极化过程。

药用作用：抑制它可以推延复极化启动，延长动作电位的平台期和动作电位时程

2. 瞬间外向钾电流(Ito)通道：又称Ka，A型通道，存在心肌细胞中，在动作电

位早期或细胞去极化早期出现的一外向钾电流。

主要特点：电压依赖的快速激活和迅速灭活 主要功能：可能是引起心肌复极化的重要电流

3. 内向整流钾通道(KIR)：广泛存在各种组织细胞，其电流称背景钾电流

主要特点：只允许K+内流和一定程度上的外流----内向整流

即膜电位负于静息电位，表现纯钾内流，弱去极化时，钾则外流，进一步去极化，外流减少甚至消失

主要功能：有利于维持细胞的静息电位和参与复极化过程 药用作用：抑制它可引起动作电位延长，也容易引起膜电位的升高 4. 乙酰胆碱敏感的钾通道：主要存在于心房细胞中

主要特点：具有电压依赖性和内向整流特性，并且是G蛋白调节通道，活性受受体调节。

主要功能：影响心肌自律性的重要因素，具有心肌保护作用

5. ATP敏感的钾通道：主要分布于心血管系统，是钾通道开放剂重要作用部位

主要特点：对细胞内ATP浓度敏感，还对其分解产物和细胞内外酸碱度敏感 主要功能：当细胞内ATP浓度明显下降，通道开放，使细胞趋于复极化或超极化，动作电位缩短，抑制钠和钙通道激活，保护心肌，血管平滑肌张力明显下降

药用：最近研究的热点，钾通道开放剂成为最强的血管扩张和降压药之一 6. 钙激活的钾通道：分高电导，中电导、小电导钙通道三种，其中高电导最重

要，广泛分布血管平滑肌

主要特点：具有钙依赖和电压依赖性，随内钙增加而增加；内钙恒定时，随膜电位升高开放

主要功能：直接参与血管张力调节 钙离子通道

依据激活方式不同分类：电压依赖性、受体操纵性、牵张激活性、背景钙通道。在心血管系统，钙通道主要是两大类：电压依赖性钙通道和受体操纵性钙通道。 1．电压依赖性钙通道：

根据通道的电活动特性，电压依赖性钙通道又可分为L、N、T、P、Q、R 6种亚型。与心血管系统相关的主要是L型和T型。L型在心肌和血管平滑肌的兴奋-