当前位置:首页 > 尿11项检测干化学测定的原理
尿液自动化分析的准确性,以及干化学分析某些实验本身存在一定的缺陷,只起初筛作用,在必要时候尿液常规检查仍以湿化学为诊断依本节将介绍尿液化学成分各种湿化学的检查方法及注意事项。 一、尿蛋白质检查
正常人尿液中蛋白质含量极少,一旦尿蛋白含量>100mg凡,蛋白质定性试验便呈阳性反应而称勺蛋白尿(proteinuria)。检验蛋白尿的重要性就在于:蛋白尿主要反映肾小球损害,以及肾小球滤过率F增加。目前用于尿蛋白定性和定量的方法较多,尿蛋白定性法常用的有加热乙酸法、磺基水杨酸法;尿董白定量法常用的有化学比色法(双缩脲法)、染料结合法(考马斯亮蓝法)。 (一)定性试验 1.加热乙酸法
原理,加热乙酸法是利用加热煮沸使蛋白质变性凝固,再加乙酸使尿液pH下降达蛋白质的等电三(pH4.7),而有利于已变性蛋白质的沉淀,同时可消除尿液中某些磷酸盐加热析出所致的混浊。 (试剂)5%乙酸溶液。 (操作)
(1)取15mmXl50mm试管1支,加入清晰尿液至管的2/3高度。手持试管下端,将试管上部斜置三火焰上加热,煮沸即止。 (2)轻轻直立试管,在黑色背景下观察煮沸部分有无混浊。 (3)滴入5%乙酸溶液3—4滴,再煮沸,立即观察结果,如无混浊出现,试验为阴性,如有混浊或絮状块,为阳性。
(结果判断)按表3—27判定结果。
注意事项)加热乙酸法较敏感,干扰因素少。本法对尿蛋白的敏感性是150mg/L,但在使用时必丽注意3点。
(1)尿液加热后出现浑浊,可能是蛋白质,亦可能是磷酸盐,故一定要加酸后再煮沸,盐类的浑浊即岿夫;而蛋白质的浑浊则不消失。
(2)尿蛋白含量很少时,加酸后才出现混浊。因此,操作必须遵照加热、加酸、再加热的程序。加入的鬃酸量也要适当,过多或过少均可使阳性反应程度减弱,因为强碱(pH≥9.0)或强酸(pH<3,0)时,都远离蛋白质的等电点出现假阴性结果。表3—8显示不同pH对尿蛋白测定结果的影响。
(3)在无机盐存在的条件下,白蛋白和球蛋白才能凝固沉淀,无盐或低盐饮食的病人因尿内电解质等量少可致假阴性。试验时可先加饱和氯化钠溶液1~2滴于尿液中,再进行操作。
2.磺基水杨酸法
(原理)磺基水杨酸又称磺柳酸,为生物碱剂,在略低于蛋白等电点的酸性环境下,磺基水杨酸的酸嘎碉离子与带正电荷的蛋白质结合成不溶性蛋白盐而沉淀(图3-20)。
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