35.36实验六：化妆品中细菌总数的测定35.36

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2009～2010 学年第二 学期第8 周

课题：实验六：化妆品中细菌总数的测定 （以雪花膏为样品） 课次：35、36 教学方法：学生实践 教师指引 教具： 实验所需仪器 教学目标： 1. 掌握化妆品中细菌总数的测定 2. 掌握细菌总数的定义及测定意义 教学重点： 重点：化妆品中细菌总数的测定 教学难点： 化妆品中细菌总数的测定 教学过程及时间分配： 组织教学（2分钟）—— 复习旧课（4分钟）—— 讲授（14分钟） ——余下为分组实验时间 课后记： 通过实验，学生掌握了无菌室的使用规范，化妆品菌落总数测定中的注意事项，培养基制备、倾注培养基的操作。

板书设计方案：

实验六：化妆品中细菌总数的测定 （以雪花膏为样品） 一、细菌总数的定义及测定意义 二、我国化妆品的微生物学质量规定 三、测定的方法 （一）、实验目的 （二）、实验原理 （三）、仪器与试剂 （四）、测定步骤 四、数据记录与处理 小结：

本次课要求同学们达到以下学习目标： 1. 掌握化妆品中细菌总数的测定 2. 掌握细菌总数的定义及测定意义 作业： 实验报告

实验六：雪花膏中细菌总数的测定

一、细菌总数的定义及测定意义 1．定义

菌落总数是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。

2．测定意义

测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。

二、我国化妆品的微生物学质量规定：

眼部化妆品及口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化妆品菌落总数不得大于500CFU／mL 或500CFU／g; 其它化妆品菌落总数不得大于1000CFU／mL 或1000CFU／g。

三、测定的方法 1．试剂、培养基和样品

（1）生理盐水：氯化钠8.5g加蒸馏水至1000mL溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90mL，103.43kPa（121℃ 15 lb）?高压灭菌20min。

（2）卵磷脂-吐温80-营养琼脂培养基

①成分：蛋白胨20g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂15g，卵磷脂1g，吐温-80 7g，蒸馏水 1000mL。

②制法：先将1g卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温-80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温-80，混匀，调pH值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃ 15lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。

（3）0.5％氯化三苯四氮唑（TTC）

①成分：TTC 0.5g，蒸馏水 100mL。

②制法：溶解后过滤，103.43kPa（121℃ 15lb）20min 高压灭菌，装于棕色试剂瓶，置于4℃冰箱备用。

（4）雪花膏

2．仪器和设备：三角瓶（250mL），量筒（200mL），pH计或精密pH试纸，高压灭菌器，试管（15×150mm），灭菌平皿，灭菌刻度吸管（10mL、1mL），恒温培养箱（36±1℃），酒精灯，放大镜。

3．操作步骤 图3—14高压灭菌器 图3—15恒温培养箱 （1）用灭菌吸管吸取1：10 稀释的检液2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，制成1：100 检液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1：1000，1：10000，??等，每种稀释度应换1支吸管。

（2）将融化并冷至45～50℃的卵磷脂—吐温-80—营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL，转动平皿使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置于36±1℃培养箱内培养48±2h。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL 卵磷脂—吐温-80—营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，