微生物检验操作指导书

化验室操作指导书（受控） 4 程中要认真、负责，严格进行无菌操作，避免环境中微生物污染。

4.2 检验所使用的稀释液、试剂、培养基接触的一切器皿必须经过有效的灭菌。 4.3 实验室所用仪器、设备的性能应定期检查和校正。

4.4 制备试剂和培养基所用的水，应为无离子水或用玻璃器皿蒸馏的蒸馏水。

4.5 检验结束后，所有带菌的培养基、试剂、稀释液和器皿必须尽快灭菌和洗刷。清洗过的器皿不应残留洗涤剂的痕迹。 5 检验记录和结果的报告

5.1 经检验的每份样品都应有完整的检验记录。样品检验过程中所用方法、出现的现象和结果等均要用文字写出试验记录，以作为对结果分析、判定的依据，记录要求详细、清楚、真实、客观、不得涂改和伪造。

5.2 检验结束后，根据检验结果，及时填写检验报告书，签字并经负责人审核签字后发出。

修订 1 2011－08－18

化验室操作指导书（受控） 5 （三）基本技术要求

1 无菌操作要求

微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多实验要求在无菌的条件下进行，主要原因，一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。要求如下： 1.1 接种细菌时必须穿工作服、带工作帽；

1.2 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用；

1.3 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用酒精棉球将手擦干净； 1.4 进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用酒精点燃烧灼三次后使用； 1.5 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及试管或平皿边；

1.6 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌活样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；

1.7 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到针和环与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼； 1.8 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 2 无菌间使用要求

2.1 无菌间应密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及门，另尽量设有的小窗，以备进入无菌间后传递物品。

2.2 无菌间应保持清洁，工作后用煤酚皂液溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与试验无关的物品。

2.3 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬掉紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离工作台1m处，照射时间不少于30分钟，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下

修订 1 2011－08－18

化验室操作指导书（受控） 6 操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精球轻轻擦拭，除去上面的灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。

2.4 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

2.5 在无菌间需用安装空调时，则应有过滤装置。 3 消毒灭菌要求

微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 3.1 灭菌前准备

3.1.1 所有需经灭菌的物品首先要清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面气孔打开。

3.1.2 装培养基的三角瓶塞好棉塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 3.2 装放

3.2.1 大型高压蒸气锅：放置灭菌物品不应超过锅内容积的80%，物品应放置锅内搁架上或铁丝筐中。

3.2.2 手提式高压锅：将物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。 3.3 设备检查

3.3.1 检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。

3.3.2 压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。

3.3.3 对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。 3.4 灭菌处理

修订 1 2011－08－18

化验室操作指导书（受控） 7 手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：

3.4.1 手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需要更换）。

3.4.2 手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用）。

3.4.3 盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放出冷气（水沸腾后排气10～15min）。

3.4.4 关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）。

3.4.5 达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸汽，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再打开盖取物，以防止突然减压液体剧烈沸腾活容器爆破。 3.5 灭菌温度与时间

3.5.1 压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间见下表：

灭菌时间，min 物 品 115℃ 不含糖等耐热培养基 含糖类等耐热培养基 染菌培养物 器械器皿 15～20 30 30 121℃ 15 3.6 灭菌处理：灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查，以免再度污染。

3.6.1 物品取出，随即检查包装的完整性，若有破坏或棉塞脱掉，不可作为无菌物品使用。

修订 1 2011－08－18