植物组织培养

植物组织培养：是将植物的离体材料无菌培养，使其生长、分化、增殖，再生出完整植株或生产次生代谢物质的技术。 植物组织培养的特点：1、培养材料经济2、培养条件可以认为控制3、生长周期短，繁殖率高4、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制

植物组织培养的应用：1、种苗快速繁殖2、苗木脱毒3、培育新品种4、保存和交换植物种质资源5、生产植物性药物和生物制品

组培快繁类型：无菌短枝型、丛生芽增殖型、器官发生型、胚状体发生型、圆球茎发生型等5种类型

组培快繁的易发问题：1、褐变是指培养材料向培养基释放褐色物质，致使培养基逐渐变褐，培养材料也随之变褐甚至死亡的现象。预防措施：1、选择合适培养基，调整激素用量2、在培养基中加入抗氧化剂3、加快继代转瓶速度4、合理使用灭菌剂

玻璃化：当植物材料不断进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状。

预防措施：1、利用固体培养基2、使用透气性好的封口材料3、适当提高培养基中无机盐的含量4、选择合适的激素种类和浓度5、适当控制培养瓶温度

污染：指在组织培养过程中，由于细菌、真菌等微生物的侵染，在培养基的表面滋生大量菌斑，造成培养材料不能生长和发育的现象。 预防措施：1、防止外植体带菌2、培养基和接种器具彻底灭菌3、严守无菌操作规程，防止操作时带入4、保持环境清洁

影响外植体发育的因素（外植体选择的要求）：1、植物基因型2、生理状态和植物长势3、取材季节4、取材部位5、外植体大小

提高试管苗驯化移栽成活率的措施：1、提高试管苗质量2、保持试管苗的水分供需平衡3、选择适宜的移栽基质4、防止菌类滋生

植物脱毒方法：1、热处理脱毒：利用病毒和寄主植物耐高温的差异，用高于常温的热空气或热水处理植株，使植株体内的病毒部分或完全钝化，而对植物本身不伤害或伤害很少。

热处理的方法包括温汤浸渍处理、热空气处理。 2、微茎尖培养脱毒：病毒在植物体内分布不均匀，在根尖和茎尖病毒含量很少或不含病毒，通过微茎尖培养，可以实现脱除病毒的目的。

花药培养的影响因素：1、基因型与母本植株的生理状态——植物的基因型是影响花药培养成功的关键因素之一。母本植株的生理状态是控制花粉发育的重要因素之一。2、花粉发育时期——大多数花药培养的最佳时期是花粉有丝分裂前后3、低温预处理——低温预处理花蕾有助于提高花药

诱导率4、培养基——花药培养常用的培养基有MS、改良MS、B5等5、培养方法——一般采用琼脂固体培养法6、培养条件——离体花药不同，对光照的反应也不一样 提高组培经济效益的措施：一、降低生产成本：1、降低污染率，提高生根率和成活率2、提高接种人员的操作水平和生产效率，减少劳务开支3、减少设备投资，正确使用仪器设备，延长使用寿命4、最大限度降低能耗，充分利用培养室空间5、适度规模生产，提高利润

二、组培苗增殖：1、培养珍稀、名特优植物和脱毒种苗，抢占市场2、培养有自主产权的组培苗，采取品牌经营策略3、利用驯化成活后的组培苗分株，扦插增殖苗木4、种苗销售与药用成分提取并举。

单细胞培养：看护培养；微室培养；平板培养

（1） 看护培养法：指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 特点：优点：①简便易行。②效果好，易于成功。 缺点：①不能在显微镜下直接观察细胞的生长过程。 用途：诱导形成单细胞系。

（2）微室培养：即将细胞培养在很少量的培养基中。 特点：优点： 在培养过程中，可以连续进行显微观察一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程 缺点：培养时间较短

用途:主要用来观察细胞生长、分裂、形成细胞团的过程。 （3）平板培养法：把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底1/3上的培养方法。 特点：优点：①可以定点观察；②分离单细胞系容易； 缺点：培养细胞气体交换不畅。

用途:分离单细胞无性系，研究其生理、生化、遗传上的差异而设计的一种单细胞培养技术。广泛应用于细胞、原生质体及融合产物的培养

便携式压力灭菌锅的使用：1.加水装锅 打开锅盖，加入清水至超过锅底搁帘1cm左右，然后放上内锅，装入待灭菌物品，盖上锅盖，对角线拧紧螺栓。

2.通电升压，排冷空气 接通电源，使灭菌锅开始工作。当压力0.05Mpa时，打开放气阀，排冷空气，待指针回零后，关闭放气阀，使灭菌锅升温加压。

3.保压 当压力达到0.01Mpa是，开始计时，使锅内蒸汽压力保持0.10~0.15Mpa的范围，维持15~30min的灭菌时间。 4．降压排汽 灭菌结束后断开电源，让锅内压力自然下降。当指针归零后打开放气阀，排放余气。

5.出锅冷却 当压力表指针为零时，打开放气阀，手戴隔热手套，开锅取出灭菌物品。