园林苗圃学课件材料

5、嫁接后管护：

(1)检查成活情况并解除绑缚：

枝接20-30天后，芽接2周左右可进行成活情况检查，并同时解除绑缚。 枝接末成活的要在夏秋时用芽接法补接。

(2)剪砧和去萌蘖：

芽接成活的要在春天开始生长前将砧木从接芽上方剪去。

枝接或芽接后剪砧的砧木上往往生长出萌蘖，争夺嫁接苗木生长养分，所以要予以去除。 (3)其它：水肥管理与一般苗木管理基本相同。 第四章 组培育苗

一、植物组织培养的定义

二、植物组织培养的种类和应用 三、植物组织培养的设备和操作 四、组织培养程序（以月季为例）

一、植物组织培养的定义

植物组织培养是指在无菌条件下，以适宜的生长发育条件，培养植物的离体活组织或部分器官，使其生成完整植株的技术。

如果是培养植物细胞，则称为植物细胞培养。有时也将细胞培养包括在组织培养中。

二、植物组织培养的种类和应用 (一)植物组织培养的种类

器官培养：以植物器官的一部分为外植体的培养。主要用于植物的无性繁殖(育苗)。

胚胎培养：以植物胚为外植体的培养。成熟胚培养主要用于育苗；未成熟胚主要用于远缘杂交育种和克服胚的败育。

子房和胚珠培养：以植物子房和胚珠为外植体的培养。主要用于植物遗传育种研究。 原生质体培养：主要用于植物的体细胞杂交研究。

(二)植物组织培养在园林植物上的应用

组织培养是花卉工厂化生产和难繁殖的观赏树木育苗所采用的主要技术。

三、植物组织培养的设备和操作 (一)组培室及其设备

工厂化生产要求比较复杂，需要专门设计施工建设。

下面主要介绍小规模组培室(年产4-20万株组培苗)的要求。

1、准备室：

面积：15-20平方米。

要求：设较大的清洗水槽1-2个，大型工作台1-2个，橱柜1-2个。

任务：器皿清洗，培养基配制、分装、高压灭菌以及试管苗出瓶、清洗整理(条件允许时后

者可另设一室)。

熟练操作工：1-2人。

设备及用具：

(1)冰箱：100-200L，1台。用于贮存药品及各种母液。

(2)高压灭菌锅：手提式的2-3个，需配电炉(2-2.5KW)或煤气炉。或中型立式的1个和手提式的1个

(3)不锈钢锅：4-6L，用于煮制培养基，需配1.5-2KW电炉。使用电饭锅更为方便。 (4)干燥箱：1个(中、小型)，用于棉塞、器皿等干热灭菌和器皿烘干。 (5)蒸馏水发生器：1台(套)。

(6)便携式酸度计：1台。

(7)天平：500克/0.1克托盘天平1台，100/0.01克托盘天平1台，50克/0.0001克电子(分析)天平1台。

(8)试剂瓶、移液管、量筒、烧杯、容量瓶等：用于配制培养基母液等。 (9)分装培养基的器具：可用下口杯，2000和1000毫升各2个。 (10)培养器皿：试管、三角瓶，数量较大。

2、无菌室(接种室)

面积：放置1台超净工作台需7-8平方米，2台需10-12平方米。在工作方便的前提下，面积宜小不宜大。

要求：地面、天花板、四壁尽可能光洁，不易沾附灰尘，方便清洁和消毒。室内设拉门，室外设缓冲间，密封条件要好，吊装紫外灯1-2支。

任务：材料消毒接种，无菌材料继代等需无菌操作的工作。

设备及用具：

(1)超净工作台：1-2台，用于接种、继代等无菌操作。

(2)医用小平车：1台，用于运送培养器皿。也可用大瓷盘代替。 (3)操作用具：酒精灯、镊子、解剖刀、解剖剪、毛刷等。

3、培养室

面积：20-30平方米。

要求：采光条件好，保温隔热，安装空调。 任务：放置培养物。

设备及用具：培养架（用于放置培养物）。

(二)组织培养操作技术 1、洗涤玻璃器皿

在清水中浸泡几小时， 在水龙头下刷去瓶内污物，

泡入浓洗衣粉水中，将瓶内外仔细刷洗干净，用流水冲洗数次，彻底冲净洗衣粉(此时的瓶子应是内外壁水膜均一，不挂水珠。不合格的应重新刷洗)。 用沥晾的方法晾干(如果急等使用可用干燥箱烘干)。

2、灭菌 物理方法：

干热(烘烤、灼烧)、湿热(蒸煮)、射线、微波、超声波、过滤(空气、溶液)、离心沉淀、清洗和大量无菌水冲洗等。 化学方法：

灭菌剂(升汞、高锰酸钾、双氧水、福尔马林、酒精、漂白粉、次氯酸钠、来苏尔、抗菌素等)。

(1)培养基灭菌--高压蒸汽灭菌法

新制备分装好的培养基，常规方法是放入高压灭菌锅内加压灭菌。

灭菌功效主要是靠温度，而不是压力。锅内压力上升可使水的沸点升高，在1．1公斤/平方厘米的压力下，锅内温度可达到121℃。这样的条件保持一定的时间，就能置各种细菌于死地，包括高度耐热的细菌芽孢。

培养基高压灭菌时，不能随意加大压力、提高温度和延长时间。否则会使培养基成分变质或效力降低。

(2)不耐热物质灭菌--过滤灭菌法

培养基中如赤霉素、玉米素、脱落酸、尿素、某些维生素等物质是不耐热的，不能用热处理方法灭菌，通常采用过滤方法灭菌。

原理是将不耐热物质溶液经防细菌滤膜(孔径小于或等于0．45μm)过滤，使小于滤膜孔径的细菌等不能透过，从而达到灭菌目的。

不耐热物质灭菌后，要尽快加入到培养基中。培养基高压蒸汽灭菌后，在冷却到40℃左右，琼脂将要凝固前，混入灭菌后的不耐热物质。

(3)耐热用具灭菌--干热灭菌法

玻璃器皿等耐热用具常用干热灭菌方法。

这些用具在洗净晾干后，要用纸张包严，然后放入干燥箱中灭菌。 利用干燥箱加热到160-180℃的温度来杀灭微生物。 时间一般需要90分钟。

(4)无菌操作器械灭菌--灼烧灭菌法

无菌操作器械如解剖刀、解剖剪、镊子等浸泡于95%酒精中，用前取出，用时先在酒精灯上灼烧，然后架在灭过菌的支架上，放凉后立即使用。用过后应擦拭干净，再浸泡于酒精中。 即浸--烧--凉--用--擦--浸--。

(5)布制品灭菌--高压蒸汽灭菌法

手套、帽子、套袖、口罩、工作服等洗净晾干后，用纸张包严，装入牛皮纸袋， 1.1公斤/平方厘米(121℃)高压蒸汽灭菌20-30分钟。

(6)无菌室灭菌

定期用70%酒精或0.5%苯酚喷雾降尘消毒；

用2%新洁尔灭或70%酒精或1%苯酚涂抹墙面、台面、各种用具表面； 用福尔马林加少量高锰酸钾密闭熏蒸；

打开紫外灯15分钟以上。

(7)植物材料表面灭菌

第一步，刷洗：去除植物材料不用的部分，用刷子、画笔刷洗，切割材料到适当大小，在流水中冲洗，视材料清洁程度，冲洗数分钟至数小时。

第二步，浸洗：用洗衣粉水(1-2角勺/100亳升)浸洗并搅动5分钟，再用流水冲洗干净。

第三步，表面灭菌：在超净工作台内操作。将材料放入灭过菌的烧杯中，倒入消毒液，不断用灭过菌的玻璃棒轻轻搅动，经过一定时间，倾倒出消毒液，在烧杯中倒入无菌水涮洗3-10次(根据去除消毒液残留的难易程度而定)，每次3分钟左右。这样的灭菌材料就可用于接种了。

3、无菌操作

准备好灭过菌的纱布(迭4层厚)，放在已灭过菌的培养皿或小瓷碟上，

用灼烧灭菌已放凉的镊子，将已完成表面灭菌的材料放在纱布上，吸干材料上的水分。 用镊子与解剖刀配合，切割材料到适当大小。 将外植体植入培养基表面(接种)。

(三)培养基制备

1、培养基成分及作用 (1)无机盐：

植物必需元素共16种(大量元素9种，微量元素7种)，在培养基中除C、H、O外，都是以无机盐形式提供。

植物必需元素的生理作用主要有四个方面：

一是组成各种化合物，参与有机体的建造，成为结构物质；

二是构成一些特殊的生理活性物质，参与活跃的生理代谢，如构成植物激素、酶、辅酶、酶的活化剂等；

三是维持离子平衡、胶体稳定、电荷平衡等； 四是影响植物形态发生和组织、器官的建成。

(2)有机成分：

培养基中若只含有大量元素和微量元素，常称为基本培养基。 在植物组织培养中，根据培养的目的不同还要在基本培养基中加入一些有机成分，如维生素、氨基酸等。

有机物是植物能够自身合成的，但在组培条件下因自身合成不足，必须人工补给，才能使培养物正常生长发育。

维生素是许多种酶的辅酶成分，氨基酸是很好的有机氮源。

(3)植物激素：

培养物是在离体条件下进行培养的，它失去了正常的激素环境。为了保证培养物能够顺利长成一棵植株，必须人工创造一个适宜的激素环境。

在培养基的各种成分中，对组培结果影响最大的是植物激素。对大多数培养材料来说，选择