酶联免疫试剂盒实验操作规程及注意事项

操作规程：

溶液配制

1、针对呋喃唑酮、呋喃它酮、氯霉素等试剂盒，他们的1X洗液、1X样品稀释液、终止液是通用的。检测数量大的情况下可以大量配制洗液、样品稀释液等，一般建议一个礼拜重配一次。 2、可以或需要前处理前配制的溶液：

呋喃类：缓冲溶液、样品稀释液、1M HCL、1M NaOH、10mM邻硝基苯甲醛、洗涤工作液

氯霉素：样品稀释液、洗涤工作液 3、检测时配制的溶液：

呋喃类：A、B液需在洗板前配制好，并混合均匀。 氯霉素：酶结合物工作液、A B液

样本处理

呋喃类：1、1g组织样本+4ml水+0.5ml 1M HCL+400ul 10nM邻硝基苯甲醛，剧烈涡动1min；

2、60℃温箱孵育1h，然后拿出来涡动30s，继续孵育0.5h； 3、依次加入5ml缓冲溶液、400ul 1M NaOH、6ml乙酸乙酯； 4、剧烈涡动1min后4000g离心10min；

5、取3ml上清液50-60℃氮气吹干，加入2ml正己烷，再加入1ml样品稀释液，高速涡动30s；

6、4000g以上，离心5min，去上层及中间层杂质，取下层液体待测。

氯霉素：1、3g样品+ 6 mL 乙酸乙酯， 充分涡动1 min后4000 g 离心 10 min；

2、取 4 mL 上层乙酸乙酯50-60℃氮气吹干，加入2 mL正己烷， 充

分涡动10 s，再加入 1 mL 样品稀释液，低速涡动 1 min；

3、4000 g 以上，离心 5 min，完全弃去上层正己烷及中间层杂质，

取 50 μL 进行检测。

检测过程

呋喃唑酮：1、加50ul标准品/样品+50ul酶标二抗+50ul抗体工作液后室温（23-27℃）反应30min；

2、每孔加260ul洗涤工作液洗板，共洗4次，拍干，加入混合好的100ul AB液，室温下避光反应15-20min（看颜色深浅），加入50ul终止液后读板。

呋喃它酮：1、加50ul标准品/样品+50ul酶结合物后室温（23-27℃）反应30min；

2、每孔加260ul洗涤工作液洗板，共洗4次，拍干，加入混合好的100ul AB液，室温下避光反应15-20min（看颜色深浅），加入50ul终止液后读板。

氯霉素：1、加50ul标准品/样品+50ul酶结合物工作液后室温（23-27℃）反应40min；

2、每孔加260ul洗涤工作液洗板，共洗4次，拍干，加入混合好的100ul AB液，室温下避光反应15-20min（看颜色深浅），加入50ul终止液后读板。

结果分析

读完数的数据均在分析软件上面进行分析。最终的结果在分析软件上面显示的是“计算结果”。

注意事项

溶液配制

溶液配制要求称量固体药品重量准确，液体量取量准，溶解充分，实验用水为纯水级（可以使用蒸馏水、纯净水、去离子水等），溶液保存日期建议不超过一周。

样本处理

组织处理要求均质均匀，鸡肉样本呈泥状，鸡皮样本尽量粉碎；称量样本质量准确；加入液体量准确；涡动速度严格按照说明书中要求，保证时间足够，尤其是针对氯霉素试剂盒；取液氮吹量准确，水浴温度建议不要高于60℃；处理完的待检液需立即检测，如需保存2-8℃可保存2天，-20℃可长期保存。

检测过程

加样量准确；加样顺序正确；反应时间和温度正确；加样时间尽量缩短；避免洗板过程出现气泡；AB液混合需均匀，避免污染。

结果分析

请使用分析软件进行分析。