生物化学第六章酶化学

3、中间产物学说---酶的工作方式 学说认为在酶促反应中，底物先与酶结合成不稳定的中间产物，然后再分解释放出酶与产物。

解释：当底物和酶结合成过渡态的中间物时，要释放一部分结合能，这部分能量的释放，使得过渡态的中间物处于比E+S更低的能级，因此使整个反应的活化能降低，使反应大大加速。 中间产物可以被证明存在，如有些可以直接用电镜观察或X射线衍射而证实其存在。

二、酶反应机制

1、酶作用专一性的机制---诱导契合学说

诱导契合学说认为（1）酶分子具有一定的柔顺性（2）酶的作用专一性不仅取决于酶与底物的结合，也取决于酶的催化基团有正确的取位。 2、酶作用高效性的机制---共价催化与酸碱催化 ? 共价催化是指：亲核催化剂或亲电子催化剂分别放出电子或吸收电子并作用于底物的缺电子中心或负电中心，迅速形成不稳定的共价中间配合物，这个中间物很容易变成转变态，因此，反应活化能大大降低，底物可以越

过较低的能阈而形成产物。 ? 酸碱催化：是通过瞬时地向反应物提供质子或从反应物接受质子以稳定过渡态、加速反应的一种催化机制。有两种酸碱催化剂，狭义的酸碱催化剂，即H离子和OH离子和广义酸碱催化剂，即质子供体和质子受体。

第四节 酶促反应动力学

一、酶促反应的基本动力学

1、底物浓度的影响---底物浓度对酶促反应速率的影响是非线性的

2、米氏方程—定量表达底物浓度与酶反应速率的关系 米氏方程：（P112）

Km ：米氏常数为酶促反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度 3、Vmax和Km---动力学基本参数 （1）Km值的求法 利用v-Cs图求，

Linweaver-Burk作图

Eadie-Hofstee 和Hanes作图

（2）米氏常数是酶学研究中的重要数据

? Km是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶的浓度无关。 ? Km的应用是有条件的（在一定的温度、pH值等条件下） ? Km值可以反映酶同底物的亲和力

如果一个酶对某底物的Km值越大，说明反应速率达到最大反应速率一半的时候所需底物浓度高，表明酶同底物的亲和力小。

（3）酶的Km值在实际应用中的重要意义

◆鉴定酶 通过测定Km值，可鉴别不同来源或相同来源但在不同发育阶段、不同生理状态下催化相同反应的酶是否属于同一种酶。

◆判断酶的最适底物 一种酶可能作用于多个底物，就有多个Km值，Km值最小的就是最适底物。

◆计算一定速率下的底物浓度

◆了解酶的底物在体内具有的浓度水平

◆判断反应方向或趋势（正逆两向的Km值常常不同）

◆判断抑制类型 测定不同抑制剂对某个酶的Km及Vmax的影响，可以判断该抑制剂作用类型。

◆推测代谢途径，一种物质在体内有不同的代谢途径，根据Km判断催化的不同途径。如丙酮酸的转化方向判断。 二、酶浓度对酶反应速率的影响

当底物浓度大于酶浓度条件下，pH、温度一定时，反应速度与酶浓度成正比 三、温度对酶反应速率的影响

温度每升高10度所增加的反应速率称为温度系数（ Q10 ）。一般化学反应的Q10为2-3（提高2-3倍）。同一种酶最适宜的温度不是一定的，跟底物浓度、激活剂、抑制剂等因素有关。

四、pH值对酶反应速率的影响

（1）酶反应具有各自的最适pH值，并且最适pH往往与等电点不一致。 （2）经过部分修饰的酶，其最适pH通常不变

（3）最适pH值主要和活性中心侧链基团的解离直接相关，并不是作用于整 个酶分子，而是改变了酶活性中心或与之相关的基团的解离状态。 五、激活剂对酶反应速率的影响 激活剂或活化剂：凡能提高酶的活性，加速酶促反应进行的物质称为激活剂或活化剂。

酶的激活与酶原的激活不同，酶激活是使已具有活性的酶的活性加强，使活性变