推荐学习K12(江苏专用)2019高考生物二轮复习 专题十 现代生物科技专题 考点29 基因工程、蛋

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考点29 基因工程、蛋白质工程和细胞工程

[直击考纲] 1.基因工程的诞生(A)。2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(B)。3.基因工程的应用(B)。4.蛋白质工程(A)。5.植物的组织培养(B)。6.动物细胞培养与体细胞克隆(A)。7.细胞融合与单克隆抗体(B)。8.动物胚胎发育的基本过程(A)。9.胚胎工程的理论基础(A)。10.胚胎干细胞的移植(A)。11.胚胎工程的应用(B)。12.转基因生物的安全性(A)。13.生物武器对人类的威胁(A)。14.生物技术中的伦理问题(A)。15.生态工程的原理(A)。16.生态工程的实例及应用(B)。

1．基因工程常考的3种基本工具

(1)限制性核酸内切酶：识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA分子。

(2)DNA连接酶：①E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端；②T4 DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。

(3)载体：①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制。②有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段(基因)插入其中。③具有特殊的标记基因——以便对含目的基因的受体细胞进行鉴定和选择。

2．基因工程的4大操作程序

(1)目的基因的获取：①从基因文库中获取。

②利用PCR技术扩增：a.原理：DNA双链复制。b.条件：模板DNA、引物、游离的脱氧核苷推荐学习K12资料

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酸、热稳定的DNA聚合酶。

③用化学方法直接人工合成。 (2)基因表达载体的构建 ①基因表达载体模式图

②基因表达载体的构建过程

(3)将目的基因导入受体细胞

①导入植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法。 ②导入动物细胞：显微注射技术。

③导入微生物细胞：感受态细胞法(用Ca处理)。 (4)目的基因的检测与鉴定 ①插入检测：DNA分子杂交技术。 ②转录检测：DNA—RNA分子杂交技术。 ③翻译检测：抗原—抗体杂交。 ④个体水平检测：抗性接种实验。 3．图解记忆蛋白质工程

2＋

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4．比较记忆植物组织培养与动物细胞培养

项目 取材 植物组织培养 植物幼嫩部位 动物细胞培养 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 过程 结果 条件 5.植物体细胞杂交与单克隆抗体制备过程比较

步骤 第一步 第二步 第三步 第四步 植物体细胞杂交过程 原生质体的制备(酶解法) 原生质体融合(物理、化学法) 杂种植株的筛选与培养 杂种植株的诱导与鉴定 获得植株个体，可以体现全能性 ①无菌；②营养；③适宜条件 新的细胞，不形成个体，不体现全能性 ①无菌、无毒；②营养、血清等；③温度和pH；④气体环境：O2、CO2 单克隆抗体制备过程 正常小鼠免疫处理 动物细胞融合(物理、化学、生物方法) 杂交瘤细胞的筛选与培养 单克隆抗体的提纯 ①两种技术手段的培养过程中都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可相同点 称为克隆，都不涉及减数分裂；②均为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件

(1)诱导融合的方法分别有哪些？融合的细胞类型有哪几种(仅考虑两两融合的细胞)? 提示 ①诱导植物体细胞的原生质体融合的方法主要有离心、振动、电激或用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。

②动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒(诱导动物细胞融合的特有因推荐学习K12资料

推荐学习K12资料 素)、电激等。

融合的细胞类型：前者—AA、BB、AB。后者—瘤瘤、B瘤、BB。 (2)各自的原理分别有哪些？

提示 前者有细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，后者有细胞膜的流动性和细胞增殖。 6．掌握克隆动物培育的流程

7．理清单克隆抗体制备的过程

题组一 基因工程和蛋白质工程

1．(2018·南通、泰州联考)乙型脑炎和伪狂犬病是猪的两种常见传染病。如图是利用基因工程技术生产能同时预防这两种病疫苗的流程图，其中PrM为乙型脑炎的特异性抗原基因，

PK、gG、gD为伪狂犬病的主要抗原基因，TK为伪狂犬病的毒性基因，pgG为启动子，BamHⅠ

和EcoRⅠ为两种限制酶，其识别序列及切割位点分别是GGATCC、GAATTC。请回答下列问题：

↓

↓

(1)过程①所需的酶有____________和____________。下列四种引物中适用于过程①的一对引物是________。

P1：5′TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG 3′ P2：5′CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG 3′ 推荐学习K12资料