流式细胞仪SOP - 图文

支撑架：用于支撑样本管、并负责启动液滴存留系统。支撑架有三个位置：位于样本管之下的中位，样本管左侧或右侧。

液滴存留系统：系统由支撑架、真空帮浦和外套管组成。当支撑架位于左侧或右侧位置时，真空帮浦就会启动，将液体从外管吸入废液筒内。上样时，须注意将支撑架位于中位，以避免过多样品被抽吸到废液筒内（当支撑架位于中位，真空帮浦停止工作）。更换样品时，让仪器保持RUN的模式，使得进样针可以反冲；切换到STANDBY模式前，确保液路已冲洗彻底以免碎片沈积到流动室中。

五、开关机操作程序

5.1 FACS Calibur 开机

1、开启细胞仪电源。

2、开启其它周边配备电源，如打印机及MO机。 3、开启计算机。

4、确认鞘流液筒有八分满的FACS Flow，确实旋紧 (鞘液筒容量为4L)。 5、将废液倒掉，并在废液筒中加入200 ml漂白水(废液筒容量为4L)。 6、将减压阀方向调在加压（Pressurize）位置。 7、排除液流管路与过滤器中的气泡。 8、取下样品管，执行 PRIME 功能两次。

9、使用1ml PBS，HIGH RUN 两分钟。可开始分析样品。

5.2 FACS Calibur 关机

关机前必要动作：清洗进样管和外套管，防止进样管堵塞、或有染料残留。

1、将样品支持架左移，取 2ml FACSClean（10%Bleach）上样品，让仪器的真空系统抽取约1ml的液体。

2、将样品支持架回正，按 HI RUN，然后让 FACSClean 清洗管路10分钟。 3、按 Standby，取下样品管，执行 PRIME功能两次。 4、取 2ml dH2O，重复上述步骤1-3。 5、注意最后只留约 1 ml dH2O 在试管中。

6、按 STANDBY 五分钟，使风扇冷却雷射后，关闭细胞仪（必要动作，以保护雷射光源。）

7、倒掉废液，并回填 200 ml漂白水。

8、将减压阀放在「VENT 漏气」位置。将鞘流液筒充填至八分满。

9、退出软件“File”?“Quit”(如有对话选项，选择“Don‘t save”)。10、确认退出计算机中所有BD应用软件，所有数据数据已储存备份。 关闭计算机。“Special”?“Shutdown”

六、FACSCalibur的日常维护

FACSCalibur的设计将仪器的维护工作减至最少，但是，为了保证仪器的正常运转和测定结果的可靠，仍需要进行一些必要的常规维护。

清洗液的选择

? FACS Clean Fluid：流式细胞仪的常规清洗用液，直接使用，可有效去除仪

器管路内的样本、染料等造成的污染。

? 漂白剂——NaClO溶液：流式细胞仪的常规清洗用液。目前市场上的漂白剂

有效氯浓度多为5-10%。0.45?m滤膜过滤后备用。

? FACS Rinse Fluid：流式细胞仪的清洗液，直接使用，可有效去除仪器管路

内积聚的蛋白成分。

? 表面活性剂——Triton等：使用浓度约为1%，0.45?m滤膜过滤后备用。使

用表面活性剂时，注意上样管中不要加满，也不要反冲，防止操作不当造成液体进入气路，或进入压力控制器。

? 蛋白酶液：测定血样以后，可以使用蛋白酶液清洗上样管，有效去除加样针、

流动池中附着的蛋白成分。0.45?m滤膜过滤后备用。

? 蒸馏水：为了防止管路内残留有清洗液，形成结晶或造成管路接口的腐蚀，

在使用清洗液清洗完毕后，一定要用蒸馏水，再次冲洗管路。0.45?m滤膜过滤后备用。

每日维护

实验结束后，请于关机前清洁加样针的外管和内管，防止加样针堵塞或有染料残留。在使用了一些荧光染（如PI、AO、TO等）后，也需要立即进行加样针的清洁。

1. 准备一只上样管，加入3ml漂白剂（可以直接使用过滤后未稀释的漂白

剂）；另一只上样管，加入3ml蒸馏水。 2. 打开支撑臂，放好有漂白剂的上样管。 3. 加样针外管跑1ml。

4. 流速选择HI档，合上支撑臂，加样针内管跑5-10分钟。 5. 取下有漂白剂的上样管，换上有蒸馏水的上样管。 6. 打开支撑臂，加样针外管跑1ml。

7. 流速选择HI档，合上支撑臂，加样针内管跑5-10分钟。 8. 按下STANDBY按钮。

9. 检查上样管内剩余的蒸馏水，应不超过1ml。

10. 关机以后，有蒸馏水的上样管应保持原位，防止加样针有结晶形成。

有时某些样本中含有大量蛋白成分，这些蛋白成分在上样针中会有残留，如果不能有效去除这些成分，积聚过多，会影响实验检测。这时建议在处理完含有蛋白成分的样本后，使用含有去蛋白成分的洗液清洗加样针。

1. 上样管中加漂白剂，清洗加样针（步骤见上文）。 2. 上样管中加蒸馏水，清洗加样针

3. 上样管中加FACS Rinse Fluid，清洗加样针 4. 上样管中加蒸馏水，清洗加样针 5. 清洗结束后，上样管中剩余1ml蒸馏水。

每月维护

流式细胞仪使用一段时间后，在鞘液管路、废液管路和流动池中会有残留的

碎片、污染物等，因此，需要定期清洗管路，要求至少每个月做一次，如果处理样本量很大，或经常使用附着性染料（如PI、AO等），则需要增加管路清洗频率。清洁管路时使用含有效氯（NaClO）浓度为1-2%的稀释漂白剂。注意用漂白剂清洗管路完毕后，必须换蒸馏水，再次冲洗管路，以防止管路有漂白剂残留。

1. 在仪器减压后，取下鞘液筒，倒空。如有必要，应清洗鞘液筒。 2. 将鞘液滤器短路，使鞘液不流经滤器，直接沿鞘液管路进入流动池。 3. 鞘液筒中倒入1-2L稀释漂白剂（注意不能使用原浓度）。 4. 上样管中加入3ml稀释漂白剂。 5. 流速选择HI档，RUN运行20-30分钟。

6. 鞘液筒用蒸馏水清洗干净，再加入蒸馏水1-2L。 7. 取下有漂白剂的上样管，换上有3ml蒸馏水的上样管。 8. 流速选择HI档，RUN运行20-30分钟。 9. 鞘液筒中换成鞘液，重新安装好鞘液滤器管路。

10. 流动池PRIME两遍，PRIME结束后，仪器自动回复到STANDBY状态。 11. 上样管中加入蒸馏水，RUN运行5分钟。 12. 仪器进入STANDBY状态，可以进行样本检测。

定期维护

需要定期进行仪器检查和清洁，这里主要谈一谈空气滤网的清洁：空气滤网

位于鞘液筒上方，可以用吸尘器或水洗的办法清洁。空气滤网需要定期检查，发现滤网脏了，就需要清洗了。

1. 外抽取下空气滤网。

2. 清洁滤网，如果水洗处理，应等滤网完全干了以后，再进行安装。 3. 装回滤网，将其慢慢推回原位。安装时注意滤网的方向，气流由下往上

通过。