高二生物 选修1 专题五 DNA和蛋白质技术练习题

高二生物 选修1 专题五 DNA和蛋白质技术练习题

一、基础知识

（一）DNA的粗提取和分离 1．DNA的粗提取

(1)概念：要利用DNA与____________，蛋白质和____________等在物理和____________方面的差异，提取DNA，去除其他成分。

(2)方法：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的____________溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的____________就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以到达分离的目的。

DNA不溶于____________，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。

____________能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受____________的高温，而DNA在___________以上才会变性。洗涤剂能瓦解_________，但对DNA没有影响。

2．DNA的鉴定

在____________的条件下，DNA遇二苯胺会染成____________。 3．实验设计 （1）选取实验材料

选用____________的生物组织，成功的可能性更大。

（2）破碎细胞，获取含DNA的滤液

动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的____________同时___________，过滤后收取滤液即可。

如是植物细胞，需要先用____________溶解____________。 （3）DNA的析出与鉴定

DNA的析出用的是与滤液体积相等的、____________的____________溶液。

鉴定DNA时在试管中先加入物质的量浓度为____________的NaCl溶液5 mL。两支试管中其中一支加入DNA丝状物，各加入二苯胺____________。

（二）蛋白质粗提取和分离 1．凝胶色谱法

(1)概念：凝胶色谱法也称作____________，是根据____________分离蛋白质的有效方法。 (2)原理：大多数凝胶是由____________构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，____________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程____________，移动速度____________；而____________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在____________移动，路程____________。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

2．缓冲溶液

(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制____________对溶液____________的影响，维持pH基本不变。

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(2)配制：通常由____________种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的____________就可以制得____________缓冲液。 3．电泳

(1)概念：带电粒子在____________的作用下发生____________的过程。

(2)原理：许多重要的生物大分子，如____________、____________等都具有____________的基团，在一定pH下，这些基团会带上____________或____________。在电场的作用下，这些带电分子会向着____________移动。电泳利用了分离样品中各种分子____________以及分子本身的____________、____________不同，使带电分子产生不同的____________，从而实现样品中各种分子的分离。

4．蛋白质提取分离一般分为____________、____________、____________、____________。 5．实验操作 I．样品处理

血红蛋白由____________肽链组成，包括两个____________和两个____________。每条肽链环绕一个____________基团，此基团可携带____________或____________。血红蛋白因含有血红素而呈现____________。 (1)红细胞的洗涤

①目的：去除____________。

②方法：____________离心，如500 r·min?1离心2 min，然后用胶头吸管吸出上层透明的____________，将下层____________的红细胞液体倒入____________，再加入____________的生理盐水，缓慢搅拌____________，低速短时间离心，如此重复洗涤____________，直至上清液中没有____________，表明红细胞已洗涤干净。

(2)血红蛋白的释放：将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加____________到原血液的体积，再加40％的____________，置于____________上充分搅拌10 min。

(3)分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合液离心后可观察到试管中溶液分为4层。

第1层：____________的甲苯层

第2层：____________的沉淀层——____________薄层固体 第3层：____________的水溶液——____________透明 第4层：其他杂质的____________色沉淀物

将液体用____________过滤，除去____________，于____________中静置片刻后，分出下层的____________液体。

(4)透析：取1 mL的__________溶液装入________中，将其放入盛有300 mL的20 mL·L的____________中(pH = _____________)，透析12 h。 II．凝胶色谱操作 (1)凝胶色谱柱的制作

①柱底部的制作

a．选择合适的橡皮塞，中间打孔。

b．在橡皮塞顶部切出锅底状_____________，在0.5 mL的___________头部切下

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?1 ___________长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。

c．剪尼龙网小圆片覆盖在___________。用___________的尼龙纱将橡皮塞___________包好，插到玻璃管一端。

d．色谱柱下端用移液管头部作___________，连接一细的___________，并用___________控制尼龙管的___________与___________，另一端放入收集___________的收集器内。 ②柱顶部的制作：插入安装了玻璃管的橡皮塞。 (2)凝胶色谱柱的装填

①填充材料：交联葡聚糖凝胶。

②方法：凝胶用___________充分溶胀后，配成___________，在与色谱柱下端连接的尼龙管打开的情况下，一次性缓慢倒入___________。

装填完后，立即连接___________，在___________高的操作压下，用300 mL的20 mol·L?1的磷酸缓冲液充分___________平衡凝胶12 h，使凝胶装填___________。 (3)样品的加入和洗脱

①加样前：打开流出口，使柱内凝胶面上的__________下降到与__________平齐，关闭出口。

②加样：用___________将1 mL___________的样品加到色谱柱的___________。 ③加样后：打开___________，使样品渗入凝胶床内，等完全进入后，关闭下端出口。小心加入缓冲液到___________，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每___________收集一管，连接收集。 Ⅲ．SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳

判断___________的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质的鉴定。 二、典题分析

例1、在破碎血细胞时，要先加入20 mL的蒸馏水，其作用是 A．DNA溶解水中

C．稀释血液，防止凝固

D．有利于搅拌

（ ） （ ）

?1?1 （ ）

B．血细胞破裂，DNA释放

例2、去除杂质，可直接在滤液中加入_________，反应10～15 min A．嫩肉粉 B．蒸馏水 C．2 mol·L

?1?1 NaCl D．酒精

?1例3、DNA在下列浓度的NaCl溶液中，溶解度最低的是

A．2mol·L B．0.015mol·L C．0.14mol·L 例4、利用凝胶色谱法什么样的蛋白质先洗脱出来 A．相对分子质量大的 C．相对分子质量小的 三、变式训练

B．溶解度高的 D．所带电荷多的

D．5mol·L （ ）

1．在下图中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度之间关系的是 （ ）

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2．在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是

（ ） （ ）

A．防止凝血 B．加快DNA析出 C．加快DNA溶解 ①DNA在氯化钠的物质的量浓度为0.14 mol·L?1时溶解度最低 ②DNA在冷却的体积分数为95％的酒精中能沉淀析出 A．两次都是①

B．两次都是②

C．第一次是①，第二次是②

4．亚铁血红素基因可携带 A．一分子CO A．甲苯

D．加速凝血

3．在DNA粗提取的实验中。有两次DNA的沉淀析出，其依据的原理是

D．第一次是②，第二次是①

（ ） （ ）

B．一分子NO C．一分子O2或CO2 D．一分子NO2

B．血红蛋白水溶液 D．其他杂质的沉淀

（ ）

B．溶解度

D．相对分子质量的大小

（ ） （ ）

D．核酸

5．将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第2层是 C．脂溶性物质的沉淀层

A．对其他分子的亲和力 C．所带电荷多少 A．糖类化合物

6．凝胶色谱法分离蛋白质的依据是

7．凝胶色谱法中所用的凝胶的化学本质大多是 8．洗涤红细胞时，分离所用方法为 A．低速成长时问离心 C．高速长时间离心

B．脂质 C．蛋白质

B．低速短时间离心 D．高速短时间离心

9．DNA的粗提取与鉴定的实验(如下图)：

(1)本实验材料选用鸡血细胞液而不是用鸡的全血，主要原因是由于鸡血细胞液中含有较高含量的___________________________________________________________________________。 (2)

图

A

中

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