2013高考要求的生物实验（师）

（5）纸层析法分离色素 层析液中的苯、丙酮、石油醚容易挥发。 将3mL层析液倒入烧杯中，层析液不能触防止色素溶解在层析液中， 将滤纸条（划线一端朝下）及滤液细线。 插入层析液中，用培养皿盖盖上烧杯。 （6）观察实验结果 图解：

称取5g绿色叶片并剪碎

提取色素 加入少量SiO2、CaCO3和10mL无水乙醇或5mL丙酮

①将干燥的滤纸剪成6cm长、1cm宽的纸条，剪去一端两角

制滤纸条 ②在距离剪角一端1 cm处用铅笔画线

用毛细吸管吸少量滤液沿铅笔线处小心均匀画一条滤液细线 画滤液细线 ① ②干燥后再重复画2—3次

①倒入烧杯3 mL层析液(以层析液高度不超过滤液细线为准)

纸上层析 ②将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中 ③用培养皿盖盖上烧杯

观察结果 滤纸条上出现四条宽度、颜色不同色素带。从上到下依次是：橙黄

色的胡萝卜素、黄色的叶黄素、蓝绿色的叶绿素a、黄绿色的叶绿素b

5．实验讨论：

1．滤纸条上的滤液细线，为什么不能触及层析液？

答：滤纸条上的滤液细线如触及层析液，滤纸上的叶绿体色素就会溶解在层析液中，实验就会失败。

研磨→漏斗过滤→收集到试管内并塞紧瓶

研钵

叶黄素（黄色） 叶绿素a（蓝绿色） 叶绿素b（黄绿色） 胡萝卜素（橙黄色） 烧杯要加盖。 扩散最快是胡四种色素之所以能被分离，是因为四种色素随萝卜素，扩散最层析液在滤纸上的扩散速度不同。 慢是叶绿素b，含量最多的是叶绿素a。 5

2．提取和分离叶绿体色素的关键是什么？

答：提取叶绿体色素的关键是：①叶片要新鲜、浓绿；②研磨要迅速、充分；③滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。分离叶绿体色素的关键是：一是滤液细线要细且直，而且要重复划几次；二是层析液不能没及滤液线。

3．本实验若不用滤纸条，而用一张完整的滤纸，应如何操作？

（四）DNA的粗提取和鉴定

1．目的要求

初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。 2．实验原理

①DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。

②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

③DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 3．实验材料

鸡血细胞液（活鸡鲜血加入0.1g/mL的柠檬酸钠溶液中静置沉淀或离心）、菜花、洋葱等。

4．方法步骤 操作步骤 （1）溶解鸡细胞核中的DNA 玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min。 向烧杯中注入2mol/L的NaCl20mL， 玻璃棒沿一个方向搅拌1min。 （2）析出含DNA的黏稠物 向上述溶液中缓慢加入150mL 蒸馏水， 玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌， 使大量含DNA的黏稠物析出并吸附在 玻璃棒周围 （3）提取含杂质较少的DNA 向烧杯中注入25mL95%的冷却酒精， 将玻璃棒连同吸附的黏稠物转移到酒 精溶液中，沿一个方向搅拌1～2min。 酒精冷却 搅拌 利用酒精溶解去黏稠物中的杂质， 获得含杂质较少的DNA（丝状物） 加入蒸馏水要 加入量 沿一个方向缓 慢搅拌 注意问题 向搅拌 分析 使鸡血细胞吸水胀破（搅拌加 速破裂），释放出细胞核中的 DNA； 使DNA溶解在2mol/L的NaCl 溶液中 使NaCl浓度降低至0.14mol/L， 保持DNA分子的完整性 向15mL 蒸馏水中注入1mL鸡血细胞， 快速沿一个方 缓慢，要控制好 析出DNA 6

（4）鉴定DNA 向1、2号试管中各加入5 mL2 mol/L NaCl溶液，向1号试管加入丝状物并 搅拌，再向两支试管分别加入2 mL 的二苯胺试剂，振荡，沸水浴3min。 1号试管溶液变蓝色，2号试管不变。 5．讨论

搅拌 沸水浴 丝状物的主要成分为DNA， 遇二苯胺（沸水浴）被染成蓝色 ①提取鸡血细胞中的DNA时，为什么要除去鸡血液中的上清液？

DNA主要存在于血细胞的细胞核中，上清液（血浆）中不含DNA。 ②步骤（1）和步骤（2）中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗？

不相同，步骤⑴加入蒸馏水是使血细胞吸水胀破，释放出DNA；步骤⑵中加入蒸馏水使NaCl浓度降低至0.14mol/L，析出DNA。 ③可以利用兔的肝脏组织提取DNA吗？

可以，但要先将肝脏组织研磨成匀浆。

二．利用显微镜观察细胞

（一）显微镜的构造和使用

1．实验目的：认识显微镜的结构，初步掌握使用显微镜的方法。 2．光学显微镜的结构、成像原理、放大倍数计算方法 （1）结构 光学部分：

目镜、镜筒、物镜、遮光器（有大小光圈）和反光镜（有平面镜和凹面镜） 机械部分：

镜座、倾斜关节、镜臂、载物台（上有通光孔、压片夹）、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。 （2）成像原理

映入眼球内的是倒立放大的虚像。 （3）放大倍数

目镜和物镜二者放大倍数的乘积

（显微镜放大倍数是指直径倍数，即长度和宽度，而不是面积。）

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3．显微镜的使用

安放 显微镜放置在桌前略偏左，距桌缘8—10cm处

目镜 镜头越长，放大倍数越小，反之越大 选择并组装镜头 物镜 镜头越长，放大倍数越大，反之越小 转动转换器，使低倍物镜对准通光孔 调节光圈 （强光时使用较小的光圈，弱光时使用较大的光圈） 对光

调节反光镜 （强光时使用平面镜，弱光时使用凹面镜） 左眼注视目镜，至视野亮度适中

放置存有标本的装片或切片 将切片或装片放在载物台上，标本正对通光孔中心

调焦：转动粗准焦螺旋（顺时针），俯首侧视镜筒慢慢下降，直到物镜接近切片（约

0.5cm），左眼观察目镜，（反时针）旋转粗准焦螺旋，使镜筒慢慢上升，看

到物像时轻微来回旋转细准焦螺旋，直到物像清晰 观察 绘图

清洁并将显微镜放回镜箱 取下装片，取出目镜和物镜镜头 4．讨论

（1）低倍镜换为高倍镜后，若看不到或看不清原来的像，可能原因是什么？ ①物像不在视野中；②焦距不在同一平面 ；③载玻片放反，盖玻片在下面 （2）如果视野中有污点，如何判断污物在何处？

①污点随载玻片的移动而移动，则位于载玻片上；

②污点不随载玻片移动，换目镜后消失，则位于目镜；换物镜后消失，则位于物镜。

低倍镜观察：上下左右移动装片，寻找理想观察的物像（细胞小而数目多）

高倍镜转换和观察：将低倍镜观察到的物像移到视野中央（如物像偏左下方，要

将其移到视野中央，仍向左下方向移动）； 转动转换器移走低倍镜，换上高倍镜； 使用光圈和反光镜调整视野亮度； 使用细准焦螺旋调节使物像清晰； 观察物像（细胞大而数目少）

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