聚合酶链式反应精选习题

一、PCR扩增的原理及条件

1．概念：PCR即_______________，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的_____为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。 2．原理

(1)DNA的热变性：在80～100 ℃的温度范围内，DNA_________结构解体，双链分开，这个过程称为_____。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。 (2)子链的合成：①需要______；②合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 3．条件

(1)______模板。

(2)分别与模板DNA两条链相结合的两种引物。 (3)A、T、G、C四种______________。

(4)耐热的DNA聚合酶，一般用Taq DNA聚合酶。 (5)需要稳定的_____和能严格控制_____的温控设备. 二、PCR反应过程

PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为____、复性和延伸三步。 1．变性：当温度上升到______以上时，双链DNA解聚为单链。 2．复性：温度下降到_______左右，两种引物通过________________与两条单链DNA结合。 3．延伸：温度上升到_____左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在_______________的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 三、实验操作 1．实验用具

(1)PCR仪：该仪器能自动调控_____，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个___________代替，操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管：总容积为0.5 mL，实际上是进行离心的场所。

(3)微量移液器：用于吸取转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头每吸取一种试剂后都要更换。 2．操作步骤

准备→____→混合→_____→反应。 四、操作提示

1．为避免外源DNA等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行__________。 2．所用的_________和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存。 五、DNA含量的测定

1．原理：利用DNA在260 nm的紫外线波段的______曲线来测定相应含量。 2．计算公式：DNA含量(μg)＝50×(260 nm的读数)×_____________。

3．生物体内DNA复制与PCR反应的区别

PCR反应的实验操作过程

若无PCR仪，可用恒温水浴锅代替，三个恒温水浴锅的温度分别为94 ℃、55 ℃和72 ℃，

然后按照上表要求，在三个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管：一种薄壁塑料管，总容积为0.5 mL。 (3)微量移液器：用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次。 3．实验操作步骤

按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放在实验桌上；用微量移液器按照配方在微量试管中依次加入各组分；盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁；将微量离心管放在离心机上，离心约10 min；将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序

1、下列关于DNA复制和PCR的描述中，正确的是( )

A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链 B．DNA复制不需要引物

C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合 D．PCR扩增的对象是氨基酸序列

2、关于DNA片段PCR扩增实验的描述中不正确的是( ) A．加入的Taq DNA聚合酶耐高温

B．不同大小DNA在电场中迁移速率不同 C．此过程需要DNA连接酶 D．扩增区域由两种引物来决定

3、某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A∶G∶T∶C＝1∶2∶3∶4，则经过PCR仪五次循环后，将产生________个DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是________个。