医学检验仪器简要攻略 - 图文

只能单项一次测完后，再测第二项。

目前全自动生物化学分析仪多采用后分光，半自动生物化学分析仪也有少数采用后分光原理。

生化试剂：双试剂(常见)，第一试剂先于样本中的干扰物质反应，第二试剂才与被检测物质反应，再进行测定。显色性，单一性

透射比浊法：在光源的光路方向上测量透射光（实际上还包括散射光）强度与入射光强度比值，并通过该比值测定出悬浮液或胶体溶液中质点的溶度，称为透射比浊法

该式与Lamber-Beer定律相似，这是生化分析仪利用透射比浊法进行定量测定的基础，该法可以与吸收光谱法共用一个检测器，所有

生化分析仪，不需增加任何部件，均可利用此法进行测定。

第四节、流式细胞术

1、 流式细胞仪分类：临床型（分析功能）、科研型（分析与分选功能） 2、 分析原理：

3、 分选原理：

激光光源：常把激光点设在液流聚焦处。为保证样品中细胞一个一个分别受到光照并且 照射强度十分一致，须将样品流与激光束正交且相交与激光能量分布峰值处。激光光源的宽度大于被测细胞，为零分辨率信号。

为了提高流式细胞仪的分辨率，发展了狭缝扫描技术：

散射光检测：

前向散射光（FSC)：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的信号，用于检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。

侧向散射光(SSC)：激光束照射细胞时，光以90°角散射的信号，侧向散射光对细胞膜、

胞质、核膜的折射率更为敏感，可提供有关细胞内精细结构和颗粒性质的信息。光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群，此为血细胞分类的基本原理，但不能分析表面分子 荧光检测：

经过特异荧光素标记细胞后，受激发照射得到的荧光信号。可以定性、定量检测细胞内某种物质的量，大多数流式细胞仪检测荧光的方向与侧向散射光相同。可以利用特定波长的双色性反射镜和带通滤波片将同一方向上的侧向散射光与荧光分开。 滤片系统：

主要元件为滤光片，分长通滤光片、短通滤光片、带通滤光片、带阻滤光片和长波通双色性反射镜等。长波通双色性反射镜：大于特定波长的光通过而将小于等于特定波长的光反射

影响流式细胞术分析的因素： 细胞的荧光染色 激光光源的稳定性 细胞流速的稳定性 细胞悬液样品的影响

流式细胞仪的组成：

① 光学系统：主要是激发和收集光学元件组成

主要由激光器和多组透镜组成，所需的检测的荧光信号，红橙黄绿；

侧向散射光的收集：SS由一与光径成45°、波长为488nm的长波通双色性反射镜（488DL）进行分离。

荧光的收集：488DL滤光片透过的光，射向一个488nm的激光带阻滤过片（488BK），它截止任何残留激光，只透过荧光。

550DL滤光片与光路成45°角，其反射小于550nm的光束到一个525nm的带通滤光片（BP525/30）滤过片。该滤光片将510-540nm的光传递到FL1检测器。

下一个分光长通滤光片600DL，也与光路成45°角。其反射小于600nm的光，并射向（BP575/30）, （BP575/30）将560-590nm的光传递至FL2检测器。 FL3、FL4同理。

② 液流系统：作用是将被测样本管中的细胞通过液体流传递到流动室，经液流聚焦形成单细胞流，使其通过检验区（激光照射区）

核心是流动室，由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央开一个长方形孔，供单个细胞通过，检测区在该孔的中心或下方。流动室内充满了鞘液，鞘液流的作用是将样品流环包，使样品液处于单细胞状态

液流驱动系统：空气泵产生压缩空气，通过鞘流压力调节器在鞘液上施加一个恒定的压力，这样鞘液以匀速运动流过流动室，在整个系统中流速不变。

改变样本的进样速率开关，可提高采样分析的速度。但这并不是提高样品流的速度，而是改变细胞间的距离，使样本流变宽且细胞间距离缩短，这样单位时间内流经激光照射区的细胞数就可以增加。

常把激光点设在液流聚焦处。为保证样品中细胞一个一个分别受到光照并且 照射强度十分一致，须将样品流与激光束正交且相交与激光能量分布峰值处。激光光源的宽度大于被测细胞，为零分辨率信号。要求高分辨时，用低速

③ 电子系统（信号检测系统）

主要由光电装换器件光电二极管、光电倍增管和信号处理电路组成。 ④ 计算机系统（信号分析系统）

控制仪器的运行和数据采集、数据分析。数据显示： ⑤ 数据转换处理系统

流式细胞仪的主要性能指标

灵敏度：衡量仪器检测微弱荧光信号的重要指标，以能检测到的单个微球上最少标有FITC或PE荧光分子的数目表示。目前FCM<100.

分辨率：用变异系数来表示，一般FCM在最佳状态时，CV值<2%。

前向散射光检测灵敏度：可检测到最小颗粒大小，目前可检测直径0.2~0.5um的生物颗粒。

分析速度：表示每秒分析的细胞数量，目前3000~6000个/秒。

4、 带通滤波片波长范围： 上下限为滤波片数值加减15，如525nm对应的是510---540nm 5、 氩离子激光器光谱为488nm

用鞘液的原因：细胞堆积使阻塞管道，影响检验结果，降低速度，激光束无法对准细胞中心 3.1 鞘液原理

标本位于轴心稳定流动，外面包被有鞘液，鞘流处于湍流状态，围绕标本喷嘴高速流动，实现两种液体的同轴流动。

标本流的位置的稳定可通过调整它与鞘液流速的比例来实现，一般比例在1:50到1：几百

第五节、血细胞分析仪

1、 库尔特原理：微小粒子通过特殊的小孔时可产生电阻变化这现象，称为库尔特原理. 2、 电阻抗血细胞计数原理：

当细胞通过检测器微孔的孔径感受区时，在内外电极之间恒流源电路上，电阻值瞬间增大，产生一个电压脉冲信号。产生的脉冲信号数，等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积大小成正比。

细胞直方图：横坐标为血细胞体积大小纵坐标为细胞的相对数量 3、 小孔换能器