3.2012-2013-1综合与设计性实验讲义

单糖苷、双糖苷或三糖苷)不同而有很大的差异。一般的游离黄酮苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈等有机溶剂及稀碱中。黄酮类化合物糖苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于热水、甲醇、乙醇及稀碱溶液，而难溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等亲脂性有机溶剂。游离黄酮和黄酮苷一般都含酚羟基，故都可溶于碱中，加酸后又沉淀出来，可利用此性质提取、分离黄酮类化合物。

玉米须中含黄酮类物质，能清除羟基和DPPH自由基，有调节小鼠脂质代谢、抗衰老和抗疲劳作用。研究结果表明低浓度的玉米须提取物也有很好的抗氧化能力。

多糖又称多聚糖(polysaccharide)，由单糖聚合成聚合度大于10的极性大分子，分子量为数万至数百万，是构成生命活动的4大基本物质之一，与生命的多种生理功能密切相关。多糖是自然界含量最丰富的生物聚合物，几乎存在于所有生物体中。多糖的种类繁多，传统水提法是研究和应用的最多的一种方法。水提法可用水煎煮提取，也可用冷水浸提。

玉米须多糖在玉米须中含量1～4%，是玉米须最主要的水溶性成分之一。大量试验证明多糖具有抗病毒、增强免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖、抗凝血等多种功效。

三、仪器和试剂

1.仪器

圆底烧瓶、冷凝管 烧杯2只，10mL、50mL量筒各1个，滤布，滴管，蒸发皿，pH试纸，玻璃棒，恒温槽，减压装置一套。紫外分光光度计，容量瓶。

2.试剂

玉米须10.0g（干燥至恒重，过40目筛，精密称取）乙醇、蒸馏水、浓盐酸、浓硫酸、苯酚、三氯化铝、锌粉、萘酚

四、实验步骤

1g玉米须放入150ml的圆底烧瓶中，以30倍水量、恒温水浴锅加热至90℃，开始计时，反应1h，离心3min（3500转/min），上清液抽滤， 1.提取

（1）黄酮苷

取玉米须柱头2.0g放入圆底烧瓶中，以1∶20为料液比，用60%乙醇于80℃水浴内提取1h；倒出，加入10mL溶剂提取30min，共提取2次，合并两次提取液过滤后，置50mL容量瓶中定容。

（2）多糖

取玉米须柱头2.0g放入圆底烧瓶中，以1∶20为料液比，用蒸馏水于90℃水浴内提取1h，倒出，加入10mL溶剂提取30min，共提取2次，合并两次提取液过滤后，置50mL容量瓶中定容。 2.鉴别

（1）α萘酚试验（Molisch紫环反应） 取检品的水溶液1ml，加5％萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入5－6滴浓硫酸，使成两液层，待2－3分钟后，两层液面出现紫红色环（糖、多糖或甙类）。 多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存在下与α萘酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。

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（2）盐酸一镁（或锌）粉试验

取检品的乙醇溶液1ml，加放少量镁粉（或锌粉），然后加浓盐酸4－5滴，置沸水浴中加热2－3分钟，如出现红色示有游离黄酮类或黄酮甙（以同法不加镁或粉做一对照，如两管都显红色则有花色素存在。如继续加碳酸试液使成碱笥即变成紫色双转变为蓝色，即证明含花色素）。

黄酮类的乙醇溶液，在盐酸存在的情况下，能被镁粉还原，生成花色甙元而呈现红色或紫色反应（个别为淡黄色、橙色、紫色或蓝色）。这是由于酮类化合物分子中含有一个碱性氧原子，致能溶于稀酸中被还原成带四价的氧原子即锌盐。本法是鉴别黄酮类的一个反应。但花色素本身在酸性下（不需加镁粉）呈红色，应加以区别。 3.含量测定方法

（1）黄酮含量测定

2g玉米须40mL乙醇，提取出来的提取液浓缩至接近50mL（小于50mL），然后用60%乙醇定容至50mL，摇匀，过滤， 精密移取续滤液4mL于10mL容量瓶中，精密加入0.1mol/L三氯化铝甲醇显色剂溶液4ml，摇匀，定容，放置10分钟。以60%乙醇为空白，测定吸光度，代入上述回归方程中，计算出百分含量。Y=29.302X+0.0213 相关系数：r=0.9999。黄酮在4ug-20ug/mL范围内,吸收度和糖含量呈良好的线性关系。 （2）多糖含量测定

取玉米须柱头2.0g放入圆底烧瓶中，以1∶20为料液比，用蒸馏水于90℃水浴内提取1h，倒出，加入10mL溶剂提取30min，共提取2次，合并两次提取液过滤后，置50mL容量瓶中定容。取滤液5mL，定容于25ml容量瓶，摇匀。从25ml容量瓶中移液0.5ml至10mL具塞试管，加1ml5%苯酚，3.5ml浓硫酸，40℃恒温水浴30min，自然冷却15min至室温，在490nm处测吸光度，在标准曲线上计算出浓度，最后计算出得率。同时精密吸取蒸馏水0.5ml, 于10ml试具塞试管中，加入5%苯酚溶液1 mL,迅速加入3.5ml浓硫酸，迅速摇匀，同法做空白在490 nm波长处测定吸收度(A)值如下：

y=0.0038+5.91x,相关系数,r=0.9999,在糖含量60~140μg/mL范围内,吸收度和糖含量呈良好的线性关系。

模块二

实验五 高锰酸钾法测定蛋壳中CaO的含量（设计性实验）

一、实验目的

1.学习间接氧化还原测定CaO的含量。

2.巩固沉淀分离、过滤洗涤与滴定分析基本操作。 3.培养学生理论联系实际，独立进行实验的能力

二、实验原理

鸡蛋壳的主要成分为CaCO3,其次为MgCO3、蛋白质、色素以及少量的Fe、Al。利用蛋壳中的Ca2+与草酸盐形成难溶的草酸盐沉淀，将沉淀经过滤洗涤分离

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2?后溶解，用高锰酸钾法测定C2O4含量，换算出CaO的含量，反应如下：

2?2? Ca?C2O4??CaC2O4?

CaC2O4?H2SO4??CaSO4?H2C2O4

??2?5HCO?2MnO?6H?2Mn+10CO2??8H2O 2244

2?CO24某些金属离子（Ba，Sr，Mg，Pb，Cd 等）与能形成沉淀对

2+2+2+2+2+

测定Ca2+有干扰。

三、实验步骤

1.蛋壳的处理。

2.CAO含量的测定。

四、思考题

1.用高锰酸钾滴定草酸根时，应注意哪些事项？

2.用(NH4)2C2O4沉淀Ca2+，为什么要先在酸性溶液中加入沉淀剂，然后在70～80℃时滴加氨水至甲基橙变黄，使Ca2C2O4沉淀？

3.为什么沉淀要洗至无Cl离子为止？

4.如果将带有Ca2C2O4沉淀的滤纸一起投入烧杯，以硫酸处理后再用KMnO4滴定，这样操作对结果有什么影响？

－

实验六 维生素C药片中抗坏血酸含量的测定（综合性实验）

一、实验目的

1.掌握标定I2标准溶液浓度的原理和方法。

2.掌握直接碘量法及其操作。

二、实验原理

维生素C又称抗坏血酸，属水溶性维生素。它广泛存在水果和蔬菜中，辣椒，山楂，番茄中含量尤为丰富。维生素C具有许多对人体健康有益的功能，临床上用于坏血病的预防与治疗，也用于贫血，过敏性皮肤病，高血脂症和感冒的治疗。成年人每日应维持维生素45mg左右，儿童40mg。维生素属于外源性维生素，人体不能合成，必须从食物中摄取。

在日常生活中，烹调食物过熟会破坏其中的维生素，水果过熟维生素含量也会减少。因为维生素还是一种还原剂，其于烯二醇基极易被氧化，因此可间接防止其他物质被氧化，所以维生素也是一种抗氧化性，可以抑制由吸烟而形成的活

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性生化氧化剂，延缓机体的衰老。维生素药片由维生素C和添加剂组成，呈白色或略带淡黄色。

本实验采用碘量法测定维生素药片中抗坏血酸的含量。碘量法是基于I2的氧

-化性及I的还原性进行测定的方法。固体碘在水中溶解度很小且容易挥发，通常将I2溶解于KI溶液以配成碘溶液，溶液保存于棕色磨口瓶中。，碘液可以用As2O3标定，也可以用已标定的Na2S2O3标准溶液标定。

用Na2S2O3标准溶液滴定I2标准溶液，接近终点时，溶液呈浅黄色，加入淀粉指试剂（如滴定前加入，由于碘一定粉吸附化合物的形成，不易与Na2S2O3反应，给滴定带来误差），继续滴定至蓝色消失即为终点。用已经标定的I2标准溶液直接测定维生素药片中抗坏血酸含量，抗坏血酸分子中的烯二醇基可被I2氧化成二酮基，即

由于抗坏血酸在碱性溶液中易被空气氧化，因此在地定时需加入HAc，使反应在弱酸条件下进行，以减少副反应的发生。用淀粉溶液作为指示剂，终点时，过理的I2与淀粉生成蓝色的加合物，反应很灵敏。

三、仪器与试剂

1.仪器

移液管，锥形瓶，容量瓶，酸式滴定管。 2.试剂

Na2S2O3标准溶液（0.02mol/L需标定）。I2标准溶液（0.01mol/L），维生素药片，淀粉指示剂（0.5%），乙酸溶液（2mol/L）,KI(AR),K2Cr2O7(分析纯)，Na2S2O3（化学纯）

四、实验步骤

1.标准溶液的配制与标定

（1）0.02mol/L Na2S2O3溶液的配制

用台式天平称取Na2S2O35H2O约1.2g，溶于适量刚煮沸并已冷却的水中，加入约0.02g后，稀释至250ml，至入细口试剂瓶中，放置1~2周后标定。

（2）0.01mol/LI2溶液的配制

在台式天平称取I2（预先磨细过）1.2~1.3g，置于250ml烧，加2.4gKI(s)，再加入少量水，搅拌，待全部溶解后，加水稀释至250ml。混合摇匀后，储藏在棕色细口瓶中，放置于暗处。

（3）Na2S2O3标准溶液的标定

精确称取0.12g基准试剂（先干燥过）于100ml小烧杯中，用少量水溶解后转入100ml容量瓶中，用水稀释至刻度。从中移取25.00ml于250ml锥形瓶中（最后用带有磨口塞的锥形瓶或碘瓶），加入10~20ml水使之溶解。加0.4gKI(s)、10ml

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