光谱分析方法

一、填空题

1、荧光分析中最重要的光谱干扰是（ ）和（ ）。

2、随着荧光物质分子的共轭π键的增大，将使荧光强度（ ），荧光峰向（ ）波方向移动。吸电子基取代将使荧光强度（ ），给电子基取代将使荧光强度（ ）。

3、荧光分析中的内转换是相同电子（ ）能级之间的无辐射跃迁，同时在跃迁过程中电子自旋（ ）。

4、荧光分析中，激发态分子回到基态或者低能激发态时，不伴随发光现象的过程，称为（ ），这个过程包括（ ）和（ ）。 5、重原子效应对荧光和磷光影响的差别在于随着相对原子质量单位的增加，荧光量子产率（ ），而磷光量子产率（ ）。

6、温度是影响荧光物质的量子效率和荧光强度的重要因素，通常，随着温度的降低，其量子效率和荧光强度（ ），并伴随光谱的（ ）。 7、荧光分析中的系间窜越是不同的（ ）能级之间的无辐射跃迁，在跃迁过程中，电子自旋方向发生（ ）。

8、化学发光分析仪器通常只有反应池和（ ），没有光源和单色器。 9、荧光激发光谱是固定（ ）波长，以（ ）为横坐标，（ ）为纵坐标的谱图。

10、荧光发射光谱是固定（ ），以（ ）为横坐标，（ ）为纵坐标的谱图。 二、选择题

1、荧光物质中，含有π-π*跃迁能级的芳香族（ ） A最弱 B最强 C中等

2、苯环上的吸电子基，如—Cl,使荧光（ ） A减弱 B增强 C不变

3、具有刚性结构的分子（ ） A不发生荧光 B易发生荧光 C无法确定

4、通常情况下，增大溶剂极性，荧光物质光谱（ ） A向短波方向移动 B不变 C向长波方向移动

5、激发态分子电子三重态比单重态寿命（ ） A短 B长 C相同

6、激发态分子经过无辐射跃迁降至第一激发态三重态（T1）的最低震动能级，然后跃迁至基态的各个振动能级所发出的光辐射，称为（ ） A拉曼散射光 B分子荧光 C分子磷光 7、荧光发射光谱与激发光谱波长的关系是（ ）

A有关 B无关 C激发光波长越短，荧光光谱越移向长波方向 8、化学发光仪中必备的条件是（ ） A氙灯 B空心阴极灯 C光电倍增管

9、荧光分光光度计的检测器通常放置在入射光的垂直方向，这是因为（ ） A这个方向的荧光强度最强 B这个方向有荧光而无磷光干扰 C这个方向可减少透射光的干扰和影响

10、由于重原子效应，下列化合物中荧光效率最低的是（ ） A碘苯 B溴苯 C氯苯 D 甲苯 三、简答题

1、试从原理和仪器两方面比较吸光光度法和荧光分析法的异同，并说明为什么荧光法的检出能力优于吸光光度法。

2、试从原理和仪器两方面比较荧光分析法，磷光分析法和化学发光分析法。 答案 一、填空题

1、拉曼散射、瑞丽散射 2、增大、长、降低、增强 3、多重态、不变

4、无辐射跃迁、内转换、系间窜越 5、降低、增加 6、增大、蓝移 7、多重态、改变 8、光电倍增管

9、荧光发射、激发光波长、荧光发射强度 10、激发光波长、荧光发射波长、荧光发射强度 二、选择题

1、B 2、A 3、B 4、C 5、B 6、C 7、B 8、C 9、C 10、A 三、简答题

1、答：原理：紫外－可见吸收光谱法是根据溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的吸收来研究物质的组成和结构的方法，而荧光分析法是由于处于第一激发单重态最低能级的分子以辐射跃迁的形成返回基态各振动能级时产生的荧光的分析方法，两者的区别在于前者研究的是吸收光谱，且电子跃迁为激发态的振动能级到基态的振动能级间的跃迁。

仪器：荧光分析仪器与分光光度计的主要差别有：a 荧光分析仪器采用垂直测量方式，即在与激发光相垂直的方向测量荧光，以消除透射光的影响；b 荧光分析器有两个单色器，分别用于获得单色器较好的激发光和用于分出某一波长的荧光，消除其它杂散光干扰。

因为荧光分析法的灵敏度高，其检出限通常比分光光度法低2～4个数量级，选择性也比分光光度法好，这是由于：a 荧光分析仪器在与激发光相垂直的方向测量荧光，与分光光度在一直线上测量相比，消除了透射光的影响，测量更为准确，灵敏度高；b 吸光光度法只采用一个单色器，而荧光分析仪器有两个单色器，分别用于获得单色性较好的激发光和分出某一波长的荧光，消除其它杂散光的干扰，其仪器的准确度、灵敏度也更高；c 荧光测量中的激发光源比吸收光度法的光源有更大的发射强度，光源更稳定，因此其仪器的准确度、灵敏度也就更高，综上所述，荧光法的检出限优于吸光光度法。

2、答：原理：荧光是由于分子处于第一电子激发单重态最低振动能级，以辐射跃迁的形成返回基态各振动能级而产生的，而磷光是由处于激发三重态的分子跃迁返回基态时所产生的辐射，它与荧光的区别是前者处于激发三重态，而后者处于激发单重态的最低能级，而化学发光的发光物质所需的激发能既不是光，也不是热和电，而是由化学反应过程所提供的化学能，在反应过程中，某一反应产物的分子接受反应能被激发后，形成激发态，当他们从激发态返回基态时，以辐射

的形成将能量释放出来，它与荧光、磷光的区别在于激发能不是光和热，而是化学反应放出的能量。

仪器：常用的荧光分析仪器由光源、单色器（两个）、液槽、检测器和信号、显示记录器五部分组成。采用垂直的方向测量方式，即在与激发光相垂直的方向测量荧光，且分析仪器有两个单色器，一个置于液槽前，用于获得单色性较好的激发光；另一个置于液槽和检测器之间，用于分出某一波长的荧光，消除其他杂散光干扰，而磷光分析仪器也与荧光分析仪器相似，由光源、激发单色器、液槽、发射单色器、检测器和放大显示装置组成，但也有某些特殊部件，如试样室应放于低温下，还有消除荧光干扰的磷光镜。

化学发光分析仪器与前面两种相比，没有激发光源，样品室也与前两种仪器不同，有分立取样式仪器和流动注射式仪器两种。