红河学院生命科学与技术学院 本科毕业论文定稿 李燕 打印 - 图文

红河学院本科毕业论文 (设计)

1.前言

石榴（Punica granatum L.）又名安石榴、若榴、天浆果等，属石榴科，石榴属落叶灌木或小乔木[1]。石榴属有2个种，作为栽培的只有1个种，即石榴（又名安石榴），耐干旱、耐贫瘠、易栽培、好管理。石榴汁种含有多种氨基酸和微量元素，《本草纲目》中记载石榴“止泻痢、下血、脱肛、崩中带下”。石榴的根、叶、花、果实、果皮、种子均可入药[2]。石榴初春新叶红嫩，夏季红花似火，秋季硕果累累，是集观叶、赏花和食果于一身的园林佳品[3] 。石榴含有多种人体所需的营养成分，果实中含有维生素C及B族维生素，有机酸、糖类、蛋白质、脂肪，以及钙、磷、钾等矿物质[2]。其石榴果大、皮薄、汁多、味甘甜、性温涩、风味浓郁、品质优良、富含多种营养，具有较高的食用和药用价值，享誉古今中外[2] ，石榴果实营养丰富，其籽粒含碳水化合物17%以上，维生素C含量超过苹果、梨1-2倍，风味甜酸爽口；除鲜食外，还可以加工成汁、酒、露[4]。

蒙自县地处云南省东南部,冬无严寒,夏无酷暑,春季气温回升早,阳光充足,昼夜温差较大，致使石榴的生长发育、开花、结果、果实成熟都随本地物候期的变化而有所提前，石榴的品质和口感已得到了海内外和全国石榴水果消费者的一致好评，争相购买。随着人们生活水平的提高，石榴日益受到人们的青睐

[5]

。蒙自县种植石榴有700多年历史,全县现有石榴面积7660hm2,投产面积5266

hm2,云南蒙自县因石榴连片栽种面积达0.63万公顷居中国前列,又以每年实现产量6万吨为中国最高而被誉为“中国石榴之乡”[6]。

石榴黑疤病是石榴生尾孢霉菌Cercospora punicae P.Henn分类地位属半亚菌亚门，丛梗孢目，暗梗孢科，尾孢菌属。病原子实层生于叶面，成微细黑点，散生。文献记载，有性世代为石榴球腔菌Mycos phaerella punicae Petr，在贵州，很难在叶上找到子囊壳。病原以分生孢子梗和分生孢子在叶片罹病组织上越冬，翌年4月中旬至5月上旬，越冬分生孢子或新生分孢子借风雨溅到石榴新梢叶上萌发出菌丝侵染，此后继行重复侵染。此病为害期一般在7月下旬至8月中旬，9-10月，由于叶上病斑数量增多，病叶率增加，叶片早落现象明显，对花芽分化不利，是来年生理落果严惩的原因之一。本实验主要通过化学防治的方法对石榴黑斑病进行防治，化学农药是指能防治植物病虫害，消灭杂草和调节植物生长的化学药剂。目前世界上生

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前言

产的农药品种已达千余种，农业上常用的有两百多种。按其主要用途可分为：杀虫、杀菌、除草、杀满、杀鼠以及植物生长调剂和土壤处理剂等。化学农药对防治病虫害，消灭杂草，提高粮、棉、油、果的产量以及在林业、牧业等生产中的重要作用是显而易见的。随着科学技术的高速发展，农药也进入了高校、高产阶段，成为决定现代化农业生产效率和产量的重要因素之一[8]。

据国内外报导，危害石榴的病害约有20余种，虫害有40种，随着我国石榴面积的不断扩大，石榴病虫害的发生和危害也愈来愈严重[9]。我国的石榴种植主要分布在陕西、安徽、山东、四川、新疆、河南、云南和新疆等地[10]。尤其是云南的蒙自成为全国最大石榴基地县目前国内对石榴病害的防治研究较多，如王先炜，刘会香等人研究的几种药剂对石榴疮痂病的防治[11]、三东枣庄市峄城区农业局植保站的孟亮进行几种杀菌剂防治石榴树黑斑病效果实验[12]、尚林的石榴干腐病防治技术[13]、云南红河州农业学校的李春梅关于蒙自地区石榴主要病害的发生规律及综合防治技术[5]、云南红河州农业学校的李健平研究云南蒙自石榴的主要病虫害及其防治措施[14]、三东枣庄市峄城区农业局植保站的孟亮研究石榴裂果的原因及其防治措施[12]等，都获得了很好的效果。石榴黑疤病是近年来才发生的新病害，目前尚没有发现国内外有此病防治的报道为了搞好该病的防治，现选择了几种杀菌剂（75％百菌清、80%代森锰锌、70%硫菌灵、80%代森锰锌+70%硫菌灵、50%多菌灵、石硫合剂），进行新病种黑疤病抑菌实验，探索出抑菌效果最好的农药及最适浓度，给该病的防治提供参考。

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2.材料与方法

2.1材料

2.1.1供试菌种

供试的菌种由鲁老师提供，在PDA培养基上活化，取得生长健壮的菌种。 2.1.2供试农药

供试的几种农药（75％百菌清、80%代森锰锌、70%硫菌灵、80%代森锰锌+70%硫菌灵、50%多菌灵、石硫合剂）来源于市场，在确定所需药剂之后，到市场上购买。置于干燥、背光处保存，供实验所需。 2.1.3培养基

采用PDA培养基：马铃薯：葡萄糖：琼脂：水=200：20：20：1000 2.1.4主要仪器

电子天平、实验室粉碎机、高压灭菌锅、超净工作台，恒温培养箱、1500瓦电炉、培养皿、锥形瓶

2.2方法

2.2.1 PDA培养基的配制

将马铃薯洗净去皮后，加入1000ml装有800ml水的烧杯中，在电炉上用小火煮30min，稍冷后用实验室粉碎机捣碎，再用沙布滤去马铃薯残渣，将滤液放回烧杯中在电炉上加热，加入称好的琼脂20g，加热溶化加入葡萄糖或蔗糖20g充分溶解后加水定溶至1000ml，稍冷却后用三角瓶分装进行高压灭菌[15]。 2.2.2黑疤病病原菌的活化

把黑疤病病原菌菌种在无菌环境下接种到PDA培养基上，置于25±1℃、RH为85%的培养箱中培养，进行活化。 2.2.3 菌种的扩繁

将保存好的石榴黒疤病病原菌菌种，用PDA培养基进行大量扩繁培养，在直径为90mm的培养皿中倒入20ml左右的培养基，用接种针将菌种接种于培养皿中，接种后分别置于25±1℃、RH为85%的光照培养箱内，培养10d左右供实验用[16]。

2.2.4化学农药不同浓度的配制

将各种化学农药（75％百菌清、80%代森锰锌、70%硫菌灵、80%代森锰锌+70%硫菌灵、50%多菌灵、石硫合剂）用无菌水配制成实验所需的不同浓度的

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材料与方法

药液，搅拌均匀，分装在不同的试管中，供实验用。

表1各种化学农药的浓度配比都根据市场农药标准浓度为依据向两边扩展 如下 农药名

原液

50%多菌灵 80％代森锰锌 石硫合剂

0 0 0

浓度一 300 400 200 300 400 400

浓度（稀释倍数） 浓度二 400 600 300 400 600 600

浓度三 500 800 400 500 800 800

浓度四 600 1000 500 600 1000 1000

浓度五 700 1200 600 700 1200 1200

0 75％百菌清

0 80％代森锰锌

+70%硫菌灵

70%硫菌灵 0

注意：在配置化学农药浓度梯度时，应该将培养基的体积一起考虑到溶剂体积成分中。

2.2.5农药稀释液对石榴黒疤病病菌室内抑制作用的测定

将培养基进行高压灭菌后，在无菌条件下，取制备好的化学农药药液分别加入到已配制好的培养基中（40℃左右），每个处理设置5个重复，在无菌条件下制成培养基平板，以单纯培养基作为对照（CK），分别接入用打孔器打好的扩大培养15d的石榴黑疤病菌饼（d＝5mm），在25℃的条件下进行恒温培养，每2~3天记录一次菌落扩展情况，用十字交叉法测定菌落直径，以其平均值代表菌落的大小并计算抑菌效率[17]。

2.3抑菌效率技术公式

纯生长量﹦菌落平均直径－菌饼直径

抑菌效率＝［（对照纯生长量－处理纯生长量）/对照纯生长量］×100％

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