高效液相色谱仪确认方案说明

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9.2.4.4合格标准：

测试项目 UV-VIS检测器基线噪声 UV-VIS检测器基线漂移 《紫外检测器的基线漂移与噪声确认记录》见附件十 9.2.5 示差折光检测器的基线漂移与噪声 9.2.5.1仪器与设备：阻尼管。 9.2.5.2测试条件： 流动相：已过滤的纯化水 检测器：示差折光检测器 柱温：35℃ 流速：1.0ml/min

9.2.5.3 测试方法：在基线稳定后测定30分钟的基线漂移和5分钟的基线噪声。 9.2.5.4测试步骤：

●将阻尼管安装好，将流动相装入，开启泵，缓慢增加流动相流速至1.0ml/min。

●待系统平衡后，调整基线在图谱的中部位置，记录基线30分钟。以图谱显示的刻度值或灵敏度与积分仪的匹配关系，计算基线噪声和漂移值。 ●基线噪声为峰－峰噪声，选择最大的噪声做为基线噪声。

计算方法：基线噪声＝图谱单位距离对应的RIU×噪声峰－峰间的垂直距离。 漂移值为30分钟内噪声的最高值和最低值之间垂直距离L对应的RIU。 计算方法：漂移值＝图谱单位距离对应的RIU×L/0.5h。 9.2.5.5合格标准： 测试项目 基线噪声： 基线漂移： 《示差折光检测器的基线漂移与噪声确认记录》见附件十一 9.2.6 梯度浓度准确度： 9.2.6.1测试条件： 流动相：已过滤的纯化水

可接受标准 ≤5×10RIU ≤5×10RIU/h -6-7可接受标准 小于0.02×10AU 小于0.5×10AU/h -3-3 专业知识分享

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柱温：35℃ 流速：1.0ml/min 9.2.6.2 测试方法：

因日常检测仅用二泵，另两泵用于清洗，因此仅检验二泵的流量比。将泵编号，分别为A、B、C、D，A、B泵用于实验，C、D泵用于清洗。测定20分钟内A、B泵按1：1的比例消耗已过滤纯化水的重量，计算RSD值。 9.2.6.3测试步骤：

●设定A流动相和B流动相的比例为1：1，流速为1.0 ml/min。

●取两个100ml烧杯，标记编号A、B，分别装入约60ml已过滤的纯化水，用天平称定总重量。 ●将A、B泵头分别放入已称定重量的装有已过滤的纯化水的烧杯中，开启泵开关，并同时计时20分钟。

●20分钟后，关闭泵开关，分别称定剩余纯化水和烧杯的重量。 ●计算RSD值。

9.2.6.4合格标准：小于±2%

《梯度浓度准确度确认记录》见附件十二 9.2.7 分析的重复性： 9.2.7.1测试条件：

色谱柱：凝胶柱（型号：TSKgel-G2000SWXL） 流动相：2.84%硫酸钠溶液

检测器：紫外检测器（234nm）；波长示差折光检测器 柱温：35℃ 流速：0.5ml/min

9.2.7.2葡萄糖醛酸溶液（5mg/ml）制备：称取葡萄糖醛酸约10mg，加流动相2000μl溶解，制成每1ml约含5mg葡萄糖醛酸的溶液。

9.2.7.3 测试方法：分别用紫外和示差检测器来检测葡萄糖醛酸的紫外和示差的吸收值，通过紫外和示差峰的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差来确认系统的重现性。

9.2.7.4 测试步骤：按色谱条件，照《高效液相色谱仪使用维护规程》和《注射用低分子量肝素钙标准操作规程》操作，单次进样测定6次，记录紫外和示差的色谱图，计算各峰的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差。 9.2.7.5 合格标准：

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保留时间的相对标准偏差小于0.5%； 峰面积的相对标准偏差小于1.0%； 峰高度的相对标准偏差小于1.0%； 《分析的重复性确认记录》见附件十三 《高效液相色谱仪性能确认记录》见附件十四 10.偏差处理记录

确认过程中如有偏差，应将发生的偏差记录在偏差处理记录中，并根据偏差处理记录修改验证或确认的方案，最终报告应包括偏差列表和对偏差的处理。

《偏差处理记录》见附件十五 11.确认结果评定与结论

质量管理部负责收集各项确认、试验结果记录，起草确认报告，报验证委员会。 验证委员会负责对确认结果进行综合评审，做出确认结论。 《确认结果分析及评价》见附件十六 12.再确认项目及检查周期

质量管理部负责根据设备仪器情况，确定再确认项目及周期，报验证小组审核。 《再确认项目及检查周期》见附件十七 13.确认人员培训

在本方案经过批准后，本验证小组组长对该方案进行培训，以保证方案顺利实施，并做好培训记录。

《培训记录》见附件十八 14、附件

附件一：文件检查记录 附件二：仪器、仪表校验

附件三：实验所需试药及试液制备记录 附件四：Auto Validation记录 附件五：高效液相色谱仪运行确认记录 附件六：阶段运行确认表 附件七：流量准确度确认记录 附件八：进样量准确度确认记录 附件九：温度准确度确认记录

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附件十：紫外检测器的基线漂移与噪声确认记录 附件十一：示差折光检测器的基线漂移与噪声确认记录 附件十二：梯度浓度准确度确认记录 附件十三：分析的重复性确认记录 附件十四：高效液相色谱仪性能确认记录 附件十五：偏差处理记录 附件十六：确认结果分析及评价 附件十七：再确认项目及检查周期 附件十八：培训记录

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