高效液相色谱仪确认方案说明

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紫外通道，仪器会发出一声“滴”响声，工作站界面显示绿色Ready字样，表明工作站与主机联接正常。

● 示差检测器与工作站联接：打开示差检测器及连接器，打开工作站示差通道，工作站界面显示绿色Ready字样时，表明示差检测器与工作站联接正常。

● 打印机与工作站联接：打开工作站中任意一份数据，添加到报告模板中，点击打印，查看打印机是否能正常打印数据报告。

● 紫外工作站对仪器的控制：点击排气、清洗程序按钮，查看仪器是否能按照设定程序进行排气、清洗管路；点击柱温箱控制按钮，查看柱温箱温度显示是否能正常升温；点击泵控制按钮，查看泵是否能正常开启；点击基线归零按钮，查看基线是否能归零。

● 示差工作站对示差检测器的控制：点击检测池冲洗按钮【RID(检测器A)R.流速开/关】，查看示差检测器上冲洗灯（R flow）是否亮起；点击检测器平衡按钮【平衡RID(检测器A)】，查看工作站中基线是否出现平衡峰；点击检测器归零按钮【检测器A零点】，查看工作站中基线是否能归零。

9.1.3 Auto Validation 9.1.3.1 确认项目： ● 波长准确性检查 ● D2灯能量检查 ● 输液稳定性的检查 ● 调温精确度的检查 ● 吸光度的准确度的检查 ● UV-VIS检测器基线漂移的检查 ● UV-VIS检测器基线噪声的检查 ● 压力极限的检查 9.1.3.2仪器与设备： 名称 阻尼管 9.1.3.3 测试条件： 流动相：已过滤的纯化水

检测器：紫外检测器，波长为250nm

型号/规格 / 编号 228-18871-91 是否在有效期内 / 专业知识分享

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柱温：35℃ 流速：1.0ml/min 9.1.5.4测试方法和步骤：

●将A、B、C、D流路放入纯化水中。 ● 装入阻尼管。

● 选择输液方式（梯度洗脱），设定流动相流速、紫外检查波长、柱温。 ● 色谱柱、检测器平衡。

● 按液晶控制面板上VP键，显示VP/TOP界面。在VP/TOP界面上按F3[VALID]键，选择第3项，按Enter键，显示Auto Validation 界面。

● 按F1[START]键，Auto Validation开始，流路B开始清洗。

● 等待清洗结束，切换至下一界面，依次开始波长准确度检查、D2灯能量检查、输液稳定性的检查、调温精确度的检查、吸光度的准确度的检查、UV-VIS检测器基线漂移和噪声的检查、压力极限的检查。

● 结果检查：检查结束，输入界面右显示的各检查项目的编号（数字键），可显示检查结果。 《实验所需试药及试液制备记录》见附件三 《Auto Validation记录》见附件四 《高效液相色谱仪运行确认记录》见附件五

运行确认合格之后要填写《阶段运行确认表》见附件六

9.2性能确认：考察仪器运行的可靠性、主要运行参数的稳定性和结果的重现性。 9.2.1 流量准确度：

9.2.1.1仪器与设备：秒表、阻尼管。 9.2.1.2 测试条件： 流动相：已过滤的纯化水 柱温：35℃

9.2.1.3测试方法和步骤：

分别设定流速为0.2ml/min，0.5ml/min，1.0ml/min等值进行校验，这些流速覆盖了实验室使用的流速范围。待流速稳定后，在流动相流出口处分别用已称定重量的称量瓶准确收集流动相，用秒表计时10分钟，不同流速各测量3次，称量完成后用天平称定称量瓶和水的总重，计算得出流速是否准确。

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9.2.1.4合格标准：

流量设定值(ml/min) RSD （%）应小于 《流量准确度确认记录》见附件七 9.2.2 进样量准确度：

9.2.2.1仪器与设备：1.5ml试样瓶（HPLC专用）、天平、1000μl移液器。 9.2.1.2 测试方法：

使用装入试样（已过滤纯化水）的1.5ml试样瓶，测定进样量为50μl的10次注入动作的注入前和注入后的重量，由重量差计算进样量准确度。 9.2.1.3测试步骤：

● 在工作站上设定运行方法的运行时间为3分钟。

● 用移液器移取1000μl已过滤纯化水，加入到1.5ml试样瓶中，用天平精密称定。 ● 将试样瓶置于样品架1（左侧）的1号位置上。

● 按液晶控制面板上VP键，显示VP/TOP界面；在VP/TOP界面上按F3[VALID]键，选择第2项，按Enter键，显示Performance Cheek 界面，输入数字10，按Enter键，显示Injection Vol界面。

● 输入称定的试样瓶+1ml水的重量数值，按Enter键；按F2[EXIT]，开始注入，切换至下一画面。

● 等待注入完毕，取出试样瓶，用天平精密称定剩余重量。

● 输入剩余重量数值；按F2[EXIT]，计算进样量准确度，显示是否合格的判定。 9.2.1.4合格标准：±2%以下。 《进样量准确度确认记录》见附件八 9.2.3 温度准确度：

9.2.3.1仪器与设备：温度计、秒表。 9.2.3.2测试方法和步骤：

将一经过校验的温度计放入柱温箱（水银头紧密接触加热块），分别设定柱温箱温度为30℃， 35℃，40℃等值进行校验，这些温度覆盖了实验室使用的柱温范围。待测温仪指示温度稳定后，记录温度显示值，每隔10分钟测一次，每个温控点测定1小时，求出平均值。设定值与平均值之

0.2 3% 合格标准 0.5 3% 1.0 2% 专业知识分享

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差为设定值误差△T，6次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc。 9.2.3.3合格标准：

温度设定值 (℃) 温度设定值误差 控温稳定性误差 《温度准确度确认记录》见附件九 9.2.4 紫外检测器的基线漂移与噪声 9.2.4.1仪器与设备：阻尼管。 9.2.4.2测试条件： 流动相：已过滤的纯化水 检测器：紫外检测器，波长为250nm 柱温：35℃ 流速：1.0ml/min

9.2.4.3 测试方法：在基线稳定后测定30分钟的基线漂移和5分钟的基线噪声。 9.2.4.4 测试步骤：

● 将阻尼管安装好，将流动相装入。

● 按液晶控制面板上VP键，显示VP/TOP界面。在VP/TOP界面上按F3[VALID]键，选择第2项，按Enter键，显示Performance Cheek 界面。 ● 输入数字9，按Enter键，显示Drift/Noise界面。

● 按F2[EXIT]，在流量1ml/min，温度40℃，波长250nm上调温开始，切换至下一画面。 ● 等待基线达到稳定状态（约1小时），基线稳定时，切换至下一画面。 ● 开始自动测定漂移，测定30分钟的基线漂移后，切换至下一画面。 ● 按F2[EXIT]时，漂移测定消除，开始噪声测定。 ● 测定5分钟的基线噪声后，切换至下一画面。

● 按F2[EXIT]时，噪声测定消除，显示漂移/噪声的测定结果是否合格的判定。 ● 按F4[SAVE]记录测试结果。

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可接受标准 30 35 |△T|＜2℃ TC ≤1℃ 40