微生物培养中的无菌技术

微生物培养中的无菌技术

一、无菌技术的概念：

无菌技术是指在微生物培养过程中防止无处不在的杂菌污染，获得纯净培养物的技术。无菌技术不仅能防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，保持微生物的纯培养，而且在分离、转接时亦能防止其他微生物污染。

获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。所以，无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面：

⒈对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ⒉将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ⒊为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ⒋实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 二、消毒灭菌

(一) 消毒灭菌的概念

灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 消毒则是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒属于部分灭菌。

消毒与灭菌的比较列表如下： 灭菌 消毒 条件 强烈的理化 因素 较为温和的物理或化学方法 (二) 消毒灭菌的方法

灭菌的方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等。灼烧灭菌是指将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层进行灼烧的灭菌方法。接种过程中，试管口或瓶口等易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌；干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃加热1～2 h可达到杀菌的目的，适用于耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等的灭菌；高压蒸汽灭菌是指将灭菌物品放置在高压蒸汽灭菌锅内，在压力为100kPa，温度为121℃的条件下维持15～30 min以达到杀菌的目的，如培养基的灭菌。

消毒的方法有：煮沸消毒、化学药剂消毒及紫外线消毒等。日常生活中经常用到的煮沸消毒法是在100℃煮沸5~6分钟，这样可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。对于一些不耐高温的液体，如牛奶，则使用巴氏消毒法，即在70~75℃煮30分钟或在80℃煮15分钟，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶中的营养成分不被破坏；化学药剂消毒是指用化学抑菌剂进行处理的消毒方法，如用酒精擦拭双手、用漂白粉消毒水源、用石灰水喷洒地面等等；紫外线消毒，常用于培养环境的空气消毒和一般物品的表面消毒,当打开紫外线消毒后，所有人要退出，以防辐射。

灭菌和消毒方法的比较列表如下：

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结果 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 常用方法 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 煮沸消毒、化学药剂消毒及紫外线消毒等 灭菌和 消毒种类 巴氏 消毒法 消毒法 紫外线 消毒法 灼烧 灭菌法 干热 灭菌法 间歇 灭菌法 蒸汽持续 灭菌法 煮15分钟 主要方法 应用范围 在70~75℃煮30分钟或在80℃牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体 气、手术器械、塑料或玻璃器皿等 接种室空气、接种箱、超净工作台等 微生物接种工具如接种环、接种针或其他金属用具等，接种过程中试管口或三角瓶口等 玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品 化学药物 用体积分数为 70％～75％的乙用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒，空醇、碘酒涂抹，来苏儿喷洒等 30 W紫外灯照射30 min 酒精灯火焰灼烧 用电热鼓风干燥箱在160～170℃加热1～2 h 100℃下蒸煮30～60 min，连续含有葡萄糖或氨基酸等不耐高温物质的培重复3d，每天1次 养基等 100℃持续加热15～30 min 微生物制品的土法生产或食用菌菌种制备 高压蒸汽 在100kPa 、121℃条件下维持灭菌法

15～30 min 培养基及多种器材、物品 2