广州大学微生物学期末实验报告《土壤中产淀粉酶芽胞杆菌的筛选》 - 图文

另附：

实验初期日志记录：

实验记录：

Day1（2015/12/3星期四）：

【配制土壤悬浊液】已配好0.9%的生理盐水并加入玻璃珠于锥形瓶，高压灭菌后，将已采集的泥土样品（河边、树下）摇匀后各取10.0g于100ml生理盐水的锥形瓶中，随后我们将其放置水浴摇床进行保温并摇匀，并在85°C~90°C区间保持了20min（目的为了杀死不能产生芽孢的细菌），取出并将该两组土壤悬浊液放置入冰箱冷藏。 Day2（2015/12/5 星期六）：

【培养土壤液中的菌种】将冰箱内的土壤悬浊液取出，待其恢复常温后，用移液枪吸取1ml并将其加入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中制成1:10浓度的提取液，并按此原理稀释为1:100、1:1000、1:10000（以及为防河边土壤有机质过多特别制备的1:100000提取液，但其后证明无菌落生成），用以上的不同浓度梯度提取液接种平板，放置进37°C恒温培养箱培养。时间记录23:00

Day3（2015/12/6 星期日）

【挑出单菌落】取出培养皿时间：22:20，培养时间为23小时。从树下的（1:100、1:1000、1:10000）中挑选出3个单菌落，并在河边的（1:100、1:1000、1:10000）中挑选出7个单菌落；将10个已灭菌的培养皿标好采样地点及提取液浓度，并在皿底画十字分为1、2、3、4区域，以便其后进行划线纯化。将以上10个已接种培养皿放入37°C恒温培养箱培养。时间记录23:30。

备注：第一次的倒平板技术未纯熟，厚度不足且手法拙劣未能把握角度和力度，故会多出现划破培养基的现象，但划线路径仍较长，这点比较满意。为防培养失败，保留土壤提取液的培养皿进行备份）

Day4（2015/12/7 星期一）

【第二次划线纯化】取出时间19:30培养时间为18小时，由于观察到其中有两个培养基中的培养结果其菌落形态颜色都十分相似，故将其筛去，留下9个菌种进行纯化。继续将其编好号打标签后进行划线纯化，并将划线后的9个培养皿放置进入37°C恒温培养箱培养，时间记录：21:40 实验记录：实质上星期天的挑菌落进行划线比较成功，已经可以筛选到杂菌落较少的单菌落（从肉眼观察）没有失败的培养皿 Day5（2015/12/8 星期二）

【第三次划线纯化】取出时间21:30培养时间约24小时（培养时间偏长），将9个菌种进行划线后继续培养，并开始配制牛肉膏蛋白胨，和淀粉牛肉蛋白胨的培养基并进行121摄氏度高压灭菌

Day6（2015/12/9 星期三）

【第四次划线纯化】取出时间20:00培养时间22.5小时，将9个菌种进行单染色法，初步判定分别编号为2、9两个菌种无杂菌（2和9均是形态差别较大并处于河边和树下不同环境下纯化的菌种），并进行淀粉水解实验，其余菌种舍去，为了明天实验的顺利展开进行第四次平板划线，为菌种保藏作准备同时继续纯化菌种进一步保证准确性。 Day7（2015/12/9 星期四）

【菌种保藏】并为保证明天的实验菌活性和菌种保藏，将2、9进行斜面接种（6支试管三组，其中一组为了明天实验活化，一组为了菌种保藏，另一组进行备用）

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