医院感染预防与控制标准SOP（精编）

97、环境微生物监测标准操作规程

一、监测指征

1、感染暴发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。

2、监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。

3、当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或系统启用时监测。

4、目标性监测的需要。 5、循证医学证据支持。 二、空气监测（沉降法）

（一）采样时间：消毒处理后与进行医疗活动之前。 （二）采样高度：距地面垂直高度80～150 cm。 （三）采样点设置

1、非洁净房间：室内面积≤30m2，在对角线上设里、中、外3点。里、外两点位置各距墙1 m；室内面积>30m2，设东、西、南、北、中5点。其中东、西、南、北4点均距墙1 m。9 cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5 min后送检培养。

2、洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同清洁级别进行布点，操作按照GB 50333-2002。9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30 min后送检培养。 （四）采样注意事项

1、采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。进入清洁房间采样须穿洁服。

2、皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；皿盖应扣放，以防污染。

3、采样结束后，由外向内合上皿盖。 4、采样完毕的培养皿应在6 h内培养。 （五）实验室检验

1、培养皿在37℃培养48 h后，进行菌落计数和致病菌检验。普通营养琼脂培养基的配制按照GB/T 4789.28-2003；菌落计数方法按照GB/T 7918.2-1987；致病菌检验：溶血性链球菌检验按照GB/T 4789、11-2003，沙门菌检验按照CB/T 4789.4-2003，铜绿假单胞菌检验按照GB/T7918.4-1987，金黄色葡萄球菌检验按照CB/T 7918.5-1987。

2、计算结果：非洁净房间以100 cm2的平皿在空气中暴露5 min即相当于10 L空气中的细菌数，计算公式为：

细菌数（cfu/m3）=1 000÷（A/100×t×10/5）×N=50 000N/At

式中：t-平皿暴露于空气中的时间（min）；N-培养后平皿上的菌落数（cfu/平皿）；A-所用平皿的面积（cm2）。

洁净房间直接以“个/（30 min·Φ90）”平皿为单位计算结果。 （六）结果判断

参照GB 15982—1995《医院消毒卫生标准》。 三、物体表面监测 （一）采样时间

消毒处理后4 h内。 （二）采样方法

被采样本面积<100cm2取全部表面；如采样面积≥100 cm2，连续采样4个位置（不可有重叠），每个位置采5 cm×5 cm的大小，用浸有无菌生理盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10 ml无菌生理盐水试管内。不规则的物体表面，用棉拭子直接涂擦，采样面积≥30 cm2。 （三）采样注意事项

1、送检时间不得超过6 h，若样品保存于4℃，则不得超过24 h。

2、消毒后采样一定要采用中和剂，不同消毒剂所用中和剂不同，可参考2002版《消毒技术规范》。

（四）实验室检验

1、取1 ml倾注培养，平行双份。37℃培养48 h，进行菌落计数和致病菌检验。普通营养琼脂培养基的配制按照GB/T 4789.28-2003；菌落计数方法按照（GB/T 7918.2-1987；致病菌检验与空气监测相同。

2、计算公式： 细菌总数（cfu/cm2）=（平板菌落数×稀释倍数）/采样面积（cm2）

（五）结果判断： 参照GB 15982-1995《医院消毒卫生标准》。

98、手部微生物学监测标准操作规程

一、适用范围

1、评价医务人员洗手、卫生手消毒、外科手消毒的效果。 2、怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时。 二、监测时机

在接触患者前或进行诊疗活动前采样。 三、采集材料

1、无菌洗脱液A（吐温1 g，蛋白胨10 g，氯化钠8.5 g，蒸馏水1000 m1）：用于普通洗手、乙醇类速干消毒剂手消毒。

2、无菌洗脱液B（吐温1 g，蛋白胨10 g，氯化钠8.5 g，亚硫酸钠2 g，蒸馏水1000 m1）：用于碘制剂手消毒。

3、无菌洗脱液C（吐温1 g，蛋白胨10 g，氯化钠8.5 g，卵磷脂2 g，蒸馏水1000 m1）：用于含氯己定手消毒。

4、无菌肉汤增菌液：用于未消毒或洗手时。

四、采集方法

（一）评价洗手、卫生手消毒、外科手消毒的效果

1、被检人洗手或手消毒后，在接触患者前或进行诊疗活动前采样。 2、被检人将双手伸出，五指并拢。

3、检查者取2支无菌棉拭子，并浸沾于含相应中和剂的无菌洗脱液中。

4、取一支棉拭子在一只手手指屈面，从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30 cm2），并随之转动采样棉拭子；按同样方法用另一支棉拭子涂擦另一只手。

5、剪去操作者手接触部位，将2支棉拭子投入10 ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

（二）当怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时

1、模拟现场实际情况，在接触患者前或进行诊疗活动前采样。 2、采集步骤同评价手卫生效果，但洗脱液改为无菌肉汤增菌液。 五、标本检测

（一）带菌量检测（平皿倾注法）

1、将采样管在混匀器上振荡20 s或用力振打80次左右。

2、用无菌吸管分别吸取1 ml待检样品接种于2个直径为90 mm无菌平皿中。 3、再加人已熔化的45～48℃的营养琼脂15～18 ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固。

4、将平皿置于（36±1）℃温箱培养48 h，计数菌落数。

5、计算公式：

细菌总数（cfu/cm2）=平板上菌落数×稀释倍数／60（cm2） （二）细菌种类鉴定

1、将无菌增菌肉汤培养液试管置于（36±1）℃温箱培养24～48 h。

2、若无菌增菌肉汤培养液试管浑浊，应根据实际情况选择血平板、中国蓝平板、双S平板、麦康凯平板或各种商用快速筛选平板进行细菌接种。

3、接种后将平板置于（36±1）℃温箱培养24～48 h，挑取可疑菌落进行微生物学鉴定，必要时做药敏或分子生物学分型。 六、注意事项

1、结果判定：卫生手消毒后细菌总数应≤10 cfu/ cm2；外科手消毒细菌总数应≤5 cfu/ cm2。 2、应根据手卫生所用方法，选择含相应中和剂的无菌洗脱液。

3、倾注时温度必须控制在45～48℃，温度过高可致细菌死亡，过低则影响倾注效果。 4、当怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时，监测目的在于考察实际工作中医务人员手卫生状况，虽然同样在接触患者前或进行诊疗活动前采样，但医务人员不一定进行了手卫生。

5、当怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时，目标微生物的监测只能定性不能定量。

6、血平板适合大多数细菌和真菌生长；中国蓝平板可筛选革兰氏阴性杆菌；双s平板可筛选沙门菌和志贺菌；麦康凯平板可筛选革兰氏阴性非发酵菌。