枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化 - 图文

→算出倍增时间

2.2.3实验方法

pH的检测：用5mL移液枪吸取4mL发酵0h后的发酵液于5mL离心管中，测其

pH，然后每隔两小时测一次，记录数据。

延滞期的判断: 画出枯草芽孢杆菌pH的变化曲线，在其达到最低点时大致可以判断结束延滞期。

对数期的检测：取一滴发酵到4h后的发酵液滴到载玻片上，涂匀，用酒精灯烘干，然后用结晶紫染色1min，用清水冲洗，再用酒精灯烘干，镜检，找几个清晰的画面，观察画面中的杆数和对生数，判断是否进入对数期。在油镜下观察枯草芽孢杆菌的形状如下图。

图2.1油镜下的枯草芽孢杆菌

平板计数：用1mL移液枪吸取1mL到9mL无菌水中，摇匀得10培养24h，然后数培养皿上的菌落数。

?1，依次这样稀

释到一个适当的稀释度，取0.1mL稀释液到无菌营养琼脂固体培养基中并涂匀，37℃

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倍增时间的计算：G =( T2 –T1 ) /3.322(㏒X2-㏒X1 )

T1、T2——对数期的任意两个时间 X1、X2—— 与T1、T2对应的活菌数

2.2.4正交试验

以蛋白酶添加量﹑玉米浆添加量作为考虑因素进行条件筛选，设计3个因素水平，以倍增时间作为第一指标，延滞期为第二指标，设计L9（3）正交实验，因素水平表见表2-1。

表2-1 因素水平表

Table1 The factor - level table

水平 level 1 2 3

2

因素

蛋白酶添加量(u/g

豆粕)

2 5 10

玉米浆添加量（%） 0.5 1.0 1.5

通过正交实验，可以得到枯草芽孢杆菌液体发酵培养基的最佳条件。

第三章 结果和分析

3.1 鉴定结果如下

1. G18

GGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTA

11

CCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGA GTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGACAGATGA HM486416.1 JF412545.1 Bacillus subtilis strain SFA6 16S ribosomal RNA gene, partial sequence Bacillus subtilis strain TUL322 16S ribosomal RNA gene, partial sequence

2678 2678 2678 2678 100% 0.0 99% 100% 0.0 99%

CP002468.1 Bacillus subtilis BSn5, complete genome HM027569.1 GU250454.1 2.G21

Bacillus subtilis strain zj2008 16S ribosomal RNA gene, partial sequence Bacillus subtilis strain BFE 5320 16S ribosomal RNA gene, partial sequence

2678 2.687e+04 100% 0.0 99% 2678 2678 2678 2678 100% 0.0 99% 100% 0.0 99%

GGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTNTGAACCGCATGGT

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TCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCNACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGACAGATGA

Bacillus amyloliquefaciens 16S ribosomal AY620954.1 2676 2676 100% 0.0 99% RNA gene, partial sequence Bacillus subtilis isolate BS-2 16S

AY172513.1

ribosomal RNA gene, partial sequence

2673 2673 99% 0.0 99%

Bacillus sp. 3639ABRRJ 16S ribosomal RNA

JF309257.1 2671 2671 100% 0.0 99%

gene, partial sequence Bacillus sp. ITCr07 partial 16S rRNA gene,

FR823399.1 2671 2671 100% 0.0 99%

isolate ITCr07 HQ727971.1 Bacillus subtilis strain Aj080718IA-25 16S 2671 2671 100% 0.0 99%

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